[发明专利]利用微生物生产d-酒石酸的方法

说明书

本发明涉及利用微生物生产d-酒石酸的方法。

d-酒石酸〔（2R，3R）-2，3-二羟丁烷-1，4-二羧酸〕是一种天然有机酸，在食品工业中可作为酸味剂用于糖果和清凉饮料，亦可作防腐剂和乳化稳定剂;在制药工业中除作为医药原料外，还作为拆分剂被大量使用。过去，d-酒石酸是用生产葡萄酒的付产物生酒石为原料生产的。由于需求的增加，由此获得的d-酒石酸远不能满足市场的需求。

目前利用微生物生产d-酒石酸的方法是：首先，用添加顺式环氧琥珀酸或其盐为诱导物的培养基，培养具有顺式环氧琥珀酸水解酶的微生物;然后，在上述微生物培养物或处理物中加入顺式环氧琥珀酸或其盐，经酶催化反应，生成d-酒石酸或其盐;接着，采用钙盐沉淀或离子交换的分离方法，分离提取反应物中的d-酒石酸。

已报道能水解顺式环氧琥珀酸为d-酒石酸的微生物有：无色杆菌属（Achromobacter），醋酸杆菌属（Acetobacter），土壤杆菌属（Agrobacterium），产碱杆菌属（Alcaligenes），不动杆菌属（Acinetobacter），诺卡氏菌属（Nocardia），根瘤菌属（Rhizobium），假单胞菌属（Pseudomonas），棒杆菌属（Corynebacterium）。

但利用上述微生物生产d-酒石酸的方法，还未见达到工业规模试验要求的报道。

本发明的目的是提供一种适合工业规模试验要求的利用微生物生产d-酒石酸的方法。

本发明所采用的微生物是本发明者从土壤中分离获得的新菌种，是具有同化顺式环氧琥珀酸能力的节杆菌属（Arthrobacter）微生物，它们的培养物或其处理物能水解顺式环氧琥珀酸或其盐，生产d-酒石酸。本发明以顺式环氧琥珀酸为微生物生长的唯一碳源来分离获得上述微生物，其分离的具体方法如下：首先将采集的土样用无菌水稀释后涂布于含顺式环氧琥珀酸二钠1%，硫酸铵1%，磷酸氢二钾0.1%，硫酸镁（含七分子水）0.05%，硫酸亚铁（含七分子水）0.001%，酵母膏0.2%，琼脂2%的培养基（PH7.0）平板上，30℃7天培养。挑取在上述平板上生长的微生物，再经初筛和复筛。本发明将获得具有生产价值的两菌株编号成JZ-1、-2。（该两菌株已以CGMCC  NO.的保藏号于1992年7月8日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心）。上述两菌株的细菌学特征见表1。

表1

菌种名编号节杆菌JZ－1节杆菌JZ－2I形态特征（1）菌体形状菌体在生长过程中，其形态经历由初期呈稍弯曲长杆状，有时呈V字形排列，后期呈短杆状到球形的变化。培养初期0.8～1μ×2.5～12μ,培养后期0.8-1μ×1.5～2μ或0.8～1μ的球菌。菌体在生长过程中，其形态经历由初期呈稍弯曲长杆状，有时呈V字形排列，后期呈短杆状到球形的变化。培养初期0.8～1μ×2.5～12μ,培养后期0.8-1μ×1.5～2μ或0.8～1μ的球菌。