[发明专利]卡达西叮发色团的生产方法

说明书

美国专利5001112中公开了一种叫作卡达西叮(Kedarcidin)的蛋白抗肿瘤抗菌素。据报道，这种抗菌素是由一种单链多肽和一种非蛋白发色团组成的复合物。卡达西叮是由一种链异壁菌属的新种菌株(streptoalloteichus Sp.nov.strain)L585-6(ATCC-53650)发酵得到的，它的分离和纯化已在上述的美国专利的例4中描述。在此专利中既没有公开从卡达西叮抗菌素中分离发色团的方法，也没有提及卡达西叮的抗肿瘤活性应归因于非蛋白发色团。

所谓新制癌菌素的抗肿瘤抗菌素是由1∶1的蛋白和非蛋白发色团复合而成。文献中公开了新制癌菌素的发色团部分可以通过用酸性甲醇溶液萃取新制癌菌素的复合物而得到；新制癌菌素的抗肿瘤特性主要归因于发色团。新制癌菌素中的发色团结构已被确定(可见于J.Antibiotics，1989，42，761-768)，然而，对于卡达西叮，用甲醇萃取的方法却不能满意地获得纯发色团。

另外一种叫金霉素的蛋白抗肿瘤抗菌素也由一种蛋白和一种非蛋白发色团组成。这种抗菌素的发色团也是用甲醇萃取抗菌素的方法获得的。(见于Biochcm.Biophys.Res.Commun.，1980，94，255-261)，并且再次发现了抗肿瘤活性主要是基于抗菌素中的发色团的。

申请者发现了其它种类的含有非蛋白发色团的蛋白抗肿瘤抗菌素，其发色团既不能成功地运用前述的甲醇萃取法，也不能运用其它的常规纯化方法从抗菌素中分离。总之，这种蛋白抗菌素的发色团，即便是能够被分离，同抗菌素复合物本身相比，它也是很不稳定的。

本发明涉及一种从卡达西叮抗菌素中获得的新型抗肿瘤发色团。

本发明提供了一种生产卡达西叮发色团的方法，其步骤如下：(a)制备卡达西叮水溶液；(b)将该水溶液以乙酸乙酯进行有机萃取，(c)收集乙酸乙酯萃取液；(d)将该萃取液加入硅胶色谱柱中，用苯—甲醇分步梯度洗脱；(e)收集含卡达西叮发色团的级分。

本发明的另外一方面是关于抑制哺乳动物中肿瘤生长的方法，它包括向该宿主给予肿瘤抑制量的卡达西叮发色团或其药用组合物。

本发明还提供了一种药用组合物，它由肿瘤抑制量的卡达西叮和药学上可接受的稀释剂或载体组成。

图1是卡达西叮发色团的红外吸收光谱(KBr片)。

图2是卡达西叮发色团溶于甲醇后的紫外吸收光谱。

图3是卡达西叮发色团在DMSO-d6中质子磁共振光谱(500.13MHz)。

图4是卡达西叮发色团在DMSO-d6中的¹³C磁共振光谱(125.76MHz)。

卡达西叮发色团可以按照美国专利5001112从卡达西叮抗肿瘤抗菌素中获得，也可以从用于生产卡达西叮发酵液中获得。一种优选的原料是用上述专利实施例4中描述的方法分离和纯化了的卡达西叮，另外一种优选的原料是通过过滤生产卡达西叮的菌株(Streptoallotei-chus)的发酵液得到的。将滤液加入阴离子交换色谱中，先用PH7-8的阳离子缓冲液，再用含NaCl的这种缓冲液洗脱，收集NaCl缓冲液洗脱的溶液。这种色谱方法去除了卡达西叮溶液中的许多杂质而且有很高的卡达西叮发色团收率。本申请者发现在将要进行下述的萃取步骤前把该洗脱液冻干处理后便于贮存，但实际上，这种洗脱液也可被直接使用。前述的过滤发酵液也可以不经过阴离子交换纯化步骤直接使用，但是要获得纯的发色团则需进一步的纯化，此方法同以纯化的卡达西叮为原料或以阴离子交换步骤部分纯化的发酵液为原料的方法相比，效率要低得多。

然后，将上述方法纯化或部分纯化的卡达西叮的水溶液以乙酸乙酯进行有机萃取。另外的一些有机溶剂，例如，提取新制癌菌素的酸性甲醇、正丁醇、苯—甲醇和氯仿—甲醇却导致发色团降解或形成乳浊液。再将乙酸乙酯萃取液加入硅胶液相色谱柱，用苯—甲醇溶液分步梯度洗脱，甲醇浓度逐渐增大。洗脱液由薄层色谱监控，然后真空浓缩含有纯化了的卡达西叮发色团的洗脱液，以获得浅黄色的无定形产品。

卡达西叮发色团具有以下的物化特性：

外观：浅黄色无定形固体。

稳定性：很不稳定，在苯、甲醇、氯仿和二甲基亚砜(DMSO)等溶液中数小时降解。

分子式：C₅₃H₆₀N₃O₁₆Cl

分子量：1029.3628

质谱：Kratos MS50质谱[M＋H]⁺1030，FAB使用间硝基苯甲醇。