[发明专利]红细胞分类计数

说明书

本发明涉及血液样品中红细胞分析，特别是涉及对血液样品中红细胞密度亚群进行群体频率分布分析的方法及用具，这一分析方法可反映早至120天前的病人血液中红细胞的历史形成和/或丧失情况。

目前，一般是通过检测病人血液中的血细胞比容计数来监测病人血液中代表净产生量减少的红细胞浓度。血细胞比容是压紧的红血细胞在离心的全血样品中所占有的百分体积。目前血细胞比容测定可经下列步骤完成：用抗凝全血充满小口径玻璃管，封闭管的一端，然后离心该管以压紧红血细胞。压紧后，约经3-5分钟测量压紧之红血细胞柱的长度和总充入长度，并作为压积红细胞的长度比例计算出血细胞比容。血细胞比容测定并不能给出关于红细胞产生和/或丧失的信息。

美国专利4，027，660、4，181，609、4，156，570、4，558，947及其它专利中描述了另外一种方法，其中包括将抗凝全血样品吸入毛细管内，在充有血液样品的管内放一个浮片，离心该血液样品以使浮片固定在红细胞层中，并使血沉棕黄层成分分类计数得以检测。该技术也被用于借助校正因数进行的血细胞比容检测，其中使用校正因数在于校正浮体沉入压紧的红细胞造成的偏差，并可校正因在血液样品中加入添加剂如草酸钾造成的偏差。血细胞比容计数是一种检测在进行检测当时的血液红细胞计数的可靠方法，但该方法不可能检测某些与新红细胞产生或红细胞丧失有关的条件。如果血细胞比容低，内科医生即警觉到这样的事实，即病人目前的病理状况或者是抑制新红血细胞生成，或者是发生了非典型的红血细胞丧失，或者是目前正存在不能产生足够红细胞的情况。然而，血细胞比容检测法通常不能确定这些非典型状况，除非它们是在读出血细胞比容时相对同时存在的。因此，例如病人在检测血细胞比容前三周有过出血史，这一血液检测试验便不一定显示这一经历，因为失血可能已引起红细胞产生量增加，以补偿出血造成的后果。

1日龄红细胞保留了当用新亚甲兰染色时使之显现为网织红细胞的核酸片段。经染色红血细胞的涂片，然后手工计算显示为网织红细胞之红细胞的百分数，即可估计出目前红细胞产生率。另外，可用商品着色剂染色来计数血液样品中的网织红细胞，其中用荧光活化的细胞分类器（FACS）检测并计数细胞。正常染色和涂片方法以及FACS均不能检测例如为正常产生速率5倍的红细胞产生速率;其可持续3天，并在采集血样前10天出现的增加了的产生率。这些现有方法只能在特定过程期间或其后1天检测增加或降低的红细胞产生情况。

L.M.Corash等人（J.ofClinical    Medicine，July，1974）描述了基于简化的密度梯度按照细胞日龄分离红细胞的方法。该文献指出，可用多种已知的细胞支持物质完成红细胞的日龄依赖性分离;细胞支持物质如牛血清白蛋白、邻苯二甲酸酯、葡聚糖及阿拉伯树胶。该文献提到这些现有方法并不符合要求，提示可使用30，000道尔顿的阿拉伯半乳聚糖多糖代替已知的支持物质。然后Corash等人的方法需要使用除去纤维蛋白的、洗过的并压紧的人红细胞，并将其铺敷在预形成的介质梯度上。

须在含有压紧之细胞和介质的离心管内充入矿物油，然后再离心分离细胞。因此Corash等人的方法费时而且操作复杂。

本发明涉及进行红血细胞分析的方法和用具，其可对全血样品中红细胞的密度亚群进行群体频率分布分析，该分析法可揭示在进行样品分析时或前两天以至在进行分析前多达大约120天期间内发生的红细胞产生增加和/或减少情况，而这些是不能按照现有技术用血细胞比容和网织红细胞测定法揭示的。

在体内，红细胞是以密度亚群的连续梯度存在的，最年轻的细胞最轻。这一现象部分原因是由于伴随红细胞老化，细胞钾和水含量的缓慢和进行性丧失。总红细胞群体的比重范围约为1.050至1.150;当样品中存在红细胞增浓剂时，或可增高10%。

本发明利用了引入离心管内的不同密度标志物，以根据它们的比重各密度来描绘红细胞群体的亚群。因此有可能进行历史性红细胞分析，借以作为追踪试验前长达120天的时间内红细胞正常和异常产生（或丧失）的指征。