[发明专利]一种病毒抗原条及制备方法与用途

说明书

本发明涉及病毒免疫学诊断领域一种载有单一抗原带的硝酸纤维膜抗原条，其制备方法，以及其在检测人血清中对所载抗原的特异性抗体的用途。

随着医学科学的进步，许多疾病被陆续征服，使病毒性疾病对人类危害日益突出。新的病毒不断被发现，有的如人免疫缺陷病毒（艾滋病毒、HIV）引起的艾滋病已造成全球性灾难。在我国许多病毒性感染的流行十分严重，严重危害我国人民健康。其中各型肝炎病毒的感染人数及所引起的病毒性肝炎病例均居世界首位;各种疱疹病毒的感染也十分严重，造成婴幼儿感染和性病，特别是EB病毒是引起我国南方鼻咽癌的病因;艾滋病毒已在我国吸毒人群、性乱错人员和归国人员中发现并有日益增加的趋势，临床艾滋病病例时有发生。目前，对这些病毒尚无有效的治疗和预防药物，其中大多数病毒的疫苗尚未研究成功，预防和控制这些病毒感染的流行和传播的主要手段是及时诊断出感染者，切断传播途径。

病毒感染的诊断常用免疫学方法诊断血清中对病毒抗原的特异性抗体，较为常用的方法有酶免疫法、凝集法和印迹或打点法。这些方法的基础即载有病毒抗原的载体有几种，但都有各自的缺陷和局限。其中最常用的聚乙烯塑料小孔虽可载各种抗原，但使用时对其他条件要求较高。凝集试验用的血球、明胶等材料本身存在自凝现象。在硝酸纤维膜上打点或印迹对抗原纯度要求很高，有些病毒抗原无法使用。基因工程表达的病毒抗原是目前病毒免疫学诊断中最常用的抗原，其中往往有很多细菌蛋白，国际上通常用柱层析法进行纯化，会损失大量抗原，使抗原成本十分昂贵，提高了试剂成本和价格。上述的免疫学诊断方法中酶免疫法虽然敏感性和特异性较高，但检测时需要严格的条件和昂贵的仪器，在检测小批量样品时浪费很大。凝集试验和打点试验的特异性较差，而印迹试验尚无法常规应用。

本发明的目的：提供一种载有单一抗原带的硝酸纤维膜抗原条，作为载体检测人血清中对所载抗原的特异性抗体。

本发明的目的是这样实现的：将单一病毒抗原用聚丙烯酰胺凝胶电泳与细菌蛋白分离并形成细带;切下分子量标记和边缘部分凝胶，加热至90-100℃用考马斯亮蓝液染色3-10分钟，通电2-3A电流5-10分钟，观察蛋白带型以确定所需蛋白的位置，然后切割成小条。这种载有单一病毒抗原带的硝酸纤维膜抗原条上所载的病毒抗原为下列病毒的基因工程抗原之一：（1）人逆转录病毒：人免疫缺陷病毒1、2型（艾滋病毒、HIV-1    HIV-2），成人T淋巴细胞白血病病毒1、2型（HTLV-1、HTLV-2）。（2）肝炎病毒：甲型肝炎病毒（HAV），乙型肝炎病毒（HBV），丙型肝炎病毒（HCV），丁型肝炎病毒（HDV），戊型肝炎病毒（HEV）。（3）疱疹病毒：单纯疱疹病毒1、2型（HSV-1、HSV-2），EB病毒，巨细胞病毒（CMV）。

上述抗原条可用于检测人血清中对所载抗原的特异性抗体以诊断病毒感染，其方法为：先将抗原条与血清样品孵育，进行洗涤后与结合物孵育，再次洗涤后加入底物液显色，终止后用肉眼观察结果、抗原条中间出现颜色带为阳性、无色为阴性。整个试验根据要求可长可短。

本发明有以下优点：（1）抗原条稳定，易于保存、运输和在现场使用;（2）制备方法很简单快速地高度纯化病毒基因工程抗原，降低了抗原成本，可用于纯化多种病毒抗原;（3）抗原条用于病毒免疫学诊断可检测各种批量样品，具有很高的敏感性和特异性，对辅助条件无特殊要求，既可进行常规检测，又可进行快速检测。

以下是本发明的实施例。

实施例一、艾滋病毒1型（HIV-1）抗原条的制备

1.抗原：基因工程重组的HIV-1包膜基因（env）编码的gp41蛋白，其分子量18KD，中国预防医学科学院病毒学研究所艾滋病毒研究室出产。

2.抗原分离：用聚丙烯酰胺电泳分离抗原与细菌蛋白。

电泳用液配方如下：

Sol    A：Tris    12.1g

H2O    100ml    PH调至8.5，

Sol    C：Acrylamide    28g

DADT    0.725g

H2O    100ml    过滤，4℃棕色瓶保存

Sol    D：1M    Tris-Hcl（PH7.0）    19.2ml

20%    SDS    0.8ml

AMPER：Ammonium    persulfate    1.4g

H2O    100ml

TEMED：-20℃保存，

1%    Agar    2g