[发明专利]具有人属性的抗人白细胞介素-5的单克隆抗体的设计，克隆和表达

权利要求书

1、单克隆抗体，其特征在于它是由具有寄存于美国典型培养物保藏中心的保藏号为ATCC HB 10959的细胞系完全相同之特性的杂交瘤产生的。

2、具有与寄存于美国典型培养物保藏中心的保藏号为ATCC  HB  10956的细脆系相同特性的杂交瘤。

3、多肽，其含有由SEQ  ID  NO：1或SEQ  ID  NO：2限定之氨基酸序列，或该序列之亚序列的单克隆抗体的可变区。

4、分离的DNA，其含有SEQ  ID  No：1限定之核苷序列的大约碱基12至333，或由SEQ  ID  NO：2限定之核苷酸序列的大约碱基9至384，或这些序列的功能等同物。

5、含有权利要求4的DNA的重组载体。

6、含有权利要求5的重组载体的宿主细胞。

7、制备多肽的方法，该方法包括在能表达DNA的条件下培养权利要求6的宿主细胞。

8、一种嵌合或人化的单克隆抗体，其特异地结合人白细胞介素-5，并且含有来自权利要求1的单克隆抗体之重和轻链可变区的CDRs。

9、根据权利要求8的人化的单克隆抗体，其含有由SEQ  ID  No：36，37，40，41，46，47，56，57，64或65限定的从第20位氨基酸残基开始之序列的重和/或轻链可变区。

10、编码权利要求9的重或轻链可变区的DNA。

11、含有权利要求10的DNA的重组载体。

12、含有权利要求11的重组载体的宿主细胞。

13、制备人化单克隆抗体的方法，该方法包括在允许DNA表达的条件下培养权利要求12的宿主细胞。

14、药物组合物，其含有选自权利要求1的单克隆抗体、含有权利要求1的单克隆抗体的重链可变区和轻链可变区的与人白细胞介素5特异地结合的结合组合物，含有权利要求1的单克隆抗体的轻和/或重链可变区之CDR的与人白细胞介素5特异性结合的单链结合蛋白，含有权利要求1重和轻链可变区的与人白细胞介素-5特异性结合的嵌合单克隆抗体，以及含有权利要求1的单克隆抗体之重和轻链可变区的CDRs的与人白细胞介素-5特异性结合的人化单克隆抗体的人IL-5拮抗物以及生理学上可接受的载体。

15、选择在动物抗体人化中用作人骨架之人抗体序列的方法，该方法包括：

a）将需要人化的动物单克隆抗体的重和轻链可变区序列与可以获得该序列信息的所有人抗体的重和轻链可变区的最适对应排列的序列进行比较，从而确定各被比较序列的百分相同性;

b）确定每一种这样的人抗体序列中的错读数;

c）将动物抗体序列的针状间隔区与（ⅰ）每一个这样的人抗体序列的相应区域和（ⅱ）具有已知三维结构的其他抗体的相应区域进行比较。

d）选择具有（ⅰ）低数目的序列错读，和（ⅱ）基于与动物抗体序列比较具有高百分率相同性和相似的针状区域间隔区两个特征得有最好结合的人抗体序列。

16、确定应选用动物单克隆抗体的哪些可变区残基进行人化的方法，包括：

a）确定该动物单克隆抗体的潜在的最低限度和最大限度残基数，其中：

（ⅰ）这样的最低限度残基包括CDR结构环加上支撑和/或定向CDR结构环所需的残基。

（ⅱ）这样的最大限度残基包括Kabat CDRs加上CDR结构环加上支撑和/或定向CDR结构环所需的残基，再加上落入CDR结构环的约10范围内的并具有约52或更大的水溶剂可接近之表面的残基;

b）完成下列结构的计算机模型绘制：

（ⅰ）需要人化的动物单克隆抗体的序列，

（ⅱ）一人抗体骨架序列，以及

（ⅲ）含有人抗体骨架序列的所有可能的重组抗体，其中已插入了步骤（a）的最低限度和最大限度残基，

该计算机模型绘制是用适合于蛋白质模型绘制的软件以及得自于具有几乎完全相同于所选人抗体骨架序列之序列的结构上已进行表征的结构信息完成的，

c）将步骤（b）计算机模型绘制中得到的结果进行比较;以及

d）选择产生具有最接近于动物单克隆抗体序列的计算机绘制之模型结构的重组抗体的最低或最大限度残基。