[发明专利]蚯蚓溶纤素的制备方法

说明书

本发明涉及一种用蚯蚓提取物制备溶解纤维蛋白药物的方法。该方法制备的溶纤素可以有效地溶解血栓，并有明显的抗凝作用。

公知的溶栓药物，如链激酶和尿激酶，一般通过静脉给药，并有产生全身溶血的危险性，其制备方法也较为复杂，尿激酶的制备需要大量的男性新鲜尿液为原料，收集较为困难。中药中也有一些活血化瘀的药物，如红花、丹参、川芎等，但其溶栓效果不明显。市售的蛇毒溶栓剂不能口服，并有明显的毒性反应。

近年来，国内外有不少关于蚯蚓提取物溶栓作用的文献报道，主要是关于蚯蚓溶纤酶提取、溶栓作用的药理研究，对该类药物的开发应用报道不多。

日本和南朝鲜合作开发出用蚯蚓提取溶纤药物，取名“龙心”，并用于临床。在GB2116565A中公开了该药物的制备方法及部分药理、疗效。该方法主要是将活蚯蚓(或某部分组织)加溶剂打碎成悬浮液，在37℃左右的温度下，保温72-100小时，然后过滤或分离得到提取液，经超滤或真空蒸发成浓缩液，再进行干燥(真空或冷冻)制成粗制的溶纤粉，此粗品活性仅为142mm²/mg-350mm²/mg，无法入药，用该粗品再经过精制工艺来提高纯度和活性，精制过程需加入极性有机溶剂，然后经沉淀-→溶解-→透析-→离子交换-→凝胶过滤(或亲合层析)-→冷冻干燥等工艺步骤得到具有较高活性的药物制品。该方法制得的粗品活性较低，不能入药，必须经过精制工艺，因此生产工艺复杂，生产周期长，工业化规模生产成本高。此外，用该方法制得的悬浮液在37℃下保温长达72-100小时，易变质。该方法制备的药物虽然进行了溶纤实验，但对溶栓实验未见实际数据。

日本专利平2-215724公开了一种真空干燥法制备蚯蚓干粉的方法，该方法将蚯蚓放入含有机或无机微酸度溶液中放养，待内腔中有菌的粪土充分排出后，粉碎得到悬浮液，再经冷冻干燥、真空干燥或负压脱水、真空回转干燥，得到蚯蚓干粉粗品，将该粗品在粉碎机下粉碎成细粉即成。

该方法工艺简单，但是真空干燥设备及工艺条件要求高，为了制得无菌的粗品，其冷冻干燥温度在-10℃--60℃，真空干燥温度-60℃-+80℃，真空度10-100mmHg以下，在此工艺条件下操作时间最长达100小时。即使采用真空回转干燥的方法，也要在10mmHg下保温操作50小时，才可得到干粉，真空回转干燥设备要求也较高。

本发明的目的：调整普通提取工艺，使制备的蚯蚓溶纤素粗品即具无毒、无菌、活性高的特性，可直接入药，从而提供一种工艺、设备简单，生产周期短，适于工业规模生产的蚯蚓溶纤素的制备方法。

本发明的要点：

本方法选用赤子爱胜蚓为原料，用清水洗涤去泥，再用新鲜蒸馏水洗涤3-5次，用组织捣碎机制成匀浆，加蒸馏水稀释提取，PH6.8-7.0，置4℃-6℃温度下放8-12小时，用离心方法收集上清液，沉渣再以同样方式提取3-4次，合并上清液，分装在透析袋中，透析24-72小时。这样可以去掉无机离子及小分子色素，提高纯度、降低毒性，然后用超滤或化学脱水方法脱水，得到浓缩液。其中适当选取超滤膜可以灭菌，如中孔纤维或5000-10000超滤膜等，也可以用聚乙二醇6000脱水。除菌后的浓缩液经过冷冻干燥，温度-20℃-60℃，时间8-16小时，即得蚯蚓溶纤素粗品，该粗品呈微黄色，活性达8500mm²/mg，可研磨后直接用药，也可用凝胶过滤等方法进一步精制再提纯。

本发明的效果：本方法将普通工艺进行调正，在粗品制备时即加入透析、超滤等工艺，使粗品的活性及纯度提高2-5倍，可直接入药，从而提供一种工艺设备简单，工艺条件易于掌握、适于规模生产的蚯蚓溶纤素的制备方法。该溶纤素粗品可制备口服、针剂、静滴等各种药剂，安全可靠、溶栓效果显著。

1、从下列系列实验证明其安全可靠性。

(1)溶纤素动物药理实验：

用本发明制备的溶纤素对家猫分组试验，观察溶纤素对心血管系统及呼吸系统的影响，测试指标为心电图、血压、心率、呼吸频率及呼吸深度。结果表明：经给药前后与对照组比较均无显著差异(P＞0.05)详见表1、表2。

用本发明制备的溶纤素对小白鼠神经系统的影响进行试验，测试小鼠的自由活动数及对戊巴比妥阈下催眠剂量的影响，结果表明与对照组无显著差异(P＞0.05)，即对小鼠中枢神经系统无明著显影响。详见表3、表4。

(2)溶纤素长期毒性实验