[发明专利]返入艮他霉素C1a硫酸小诺霉素发酵法

说明书

本发明涉及一种抗生素生产发酵方法，特别是一种返入艮他霉素C₁a硫酸小诺霉素发酵法。

目前，采用的硫酸小诺霉素发酵法，发酵单位较低，一般在1000单位/毫升左右，并且发酵副产品艮他霉素C₁a（GMC₁a）占发酵单位40%左右，对人体毒性大，利用率低，尚无有效利用途径。

本发明的目的就是要提供一种返入艮他霉素C₁a硫酸小诺霉素发酵法，它能有效地提高硫酸小诺霉素的发酵单位，使发酵副产物艮他霉素C₁a（GMC₁a）利用率增高。

本发明的目的是这样实现的：返入艮他霉素C₁a硫酸小诺霉素发酵法，包括下列发酵工艺过程：沙土管保藏、斜面孢子培养、种液培养、发酵培养。在发酵培养至72小时，培养温度为32±1℃，发酵液PH为6.8-8.0时，在无菌条件下，向发酵培养液中加入艮他霉素C₁a（GMC₁a），再继续发酵至146小时。加入艮他霉素C₁a（GMC₁a）后，发酵液的PH值调升为7.5-8.0，发酵培养温度为32±1℃。

本发明由于采用在发酵中途返入发酵副产物艮他霉素C₁a（GMC₁a），所以，使硫酸小诺霉素（SGM）的发酵单位每毫升含量上升48-69%;同时，又由于艮他霉素C₁a（GMC₁a）本身是硫酸小诺霉素发酵的副产物，所以，将其回收利用，提高了艮他霉素C₁a（GMC₁a）的利用价值。本发明还具有操作方便，生产成本低廉等优点。

本发明的具体方法由以下的实施例给出。

返入艮他霉素C₁a硫酸小诺霉素发酵法的工艺流程为：

沙土管→F₁斜面 (生化培养箱)/(37℃，192小时) F₂斜面

(生化培养箱)/(37℃，192小时) 成熟的斜面 (挖块)/(接种) 种子培养基

(摇床培养PH7.2（消前）)/(37℃，40-44小时) 种液 (移入)/(10%的接种量) 发酵培养基

(摇床培养PH8.0（消前）)/(35℃，48小时) 发酵液 (摇床培养PH7.2-7.4)/(32℃，至72小时) 加入艮他霉素C₁a（GMC₁a） (摇床培养PH7.5-8.0)/(32℃，至146小时) 发酵结束

具体操作步骤如下所述：（实验室上摇床，摇床型号为ZP-96型，转速230转/分钟，使用300毫升大口三角瓶）。

1、将培养成熟的菌种棘孢小单孢菌JRIM-401突变株，斜面挖块接入已灭菌的种子培养基中，上摇床，培养温度为37℃，时间为40-44小时;

2、培养成熟的种液，按10%的接种量，移入已灭菌后的发酵培养基中，培养时间0-48小时，温度为35℃，当培养时间为48小时，温度降为32℃，培养至72小时时，在培养温度32℃，发酵液PH值7.2-7.4时，在无菌条件下，向发酵培养基中加入一定量的艮他霉素C₁a（GMC₁a），然后，将发酵液PH值调升为7.5-8.0，发酵培养温度32℃不变，（测发酵液PH值用精密试纸6.4-8.0）;

3、发酵培养至146小时时结束发酵，然后用6N硫酸溶液酸化至发酵液PH为2.0（测量PH值用精密试纸0.5-5.0），静置30分钟后，用漏斗滤纸过滤，取滤液测发酵效价组份。

组份鉴定菌为枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501，纸层分析，点样量为0.4微升。

效价鉴定菌为短小芽孢杆菌CMCC（B）63202，稀释样品5单位/毫升。

实施例：

摇床ZP-96型，转速230转/分钟，使用300毫升大口锥形瓶上摇床培养，种子瓶基础料30毫升，发酵基础料27毫升，无菌处理，处理瓶数24瓶，对照瓶数24瓶，PH值测定用精密试纸6.4-8.0，过滤用滤纸、漏斗。

1、将经过冷藏的菌种斜面挖块接种于灭菌后的种子培养基中，培养温度37℃，培养时间41小时;