[发明专利]蛋白质C衍生物

说明书

本发明属于人类医学领域，特别是血凝固紊乱的治疗。最具体地说，本发明涉及人蛋白质C分子的衍生物、使用这些衍生物的方法以及含有这些蛋白质C衍生物的药物组合物。

蛋白质C是一种依赖于维生素K的血浆蛋白，该蛋白质主要以无活性的二硫键结合杂二聚体形式进行循环。该杂二聚体由一条约25千道尔顿的轻链和一条约41千道尔顿的重链组成。重链含有丝氨酸蛋白酶区域及其N末端活化肽，而轻链含有γ-羧基谷氨酸残基区，该区域对于依赖于钙的膜结合和功能活性是必需的。借助于凝血酶/凝血调理素复合物的作用可将无活性的人蛋白质C酶原转变为活化的蛋白质C。所述复合物的作用是切下活化肽（循环酶原的158至169位残基或前原酶原的200至211位残基）形成活化的蛋白质C。

蛋白质C作为治疗剂的作用已得到充分的认识（参见例如，Bang等人的美国专利4，775，624公开了编码人蛋白质C酶原的DNA序列;Bang等人的美国专利4，992，373公开了制备活化人蛋白质C的方法）。一种命名为FLIN的人蛋白质C衍生物由Gerlitz等人在欧洲专利申请91301450.2中公开。该FLIN衍生物在活化肽的167位（前原酶原的206位）含有Phe残基而不是Asp残基，在重链内的172位（前原酶原的214位）含有Asn残基而不是Asp残基。该该FLIN衍生物比野生型人蛋白质C酶原更容易受凝血酶的激活。Gerlitz等人在欧洲专利申请91301446.0中公开了其他人蛋白质C衍生物，命名为Q313和Q329。Q313衍生物在野生型酶原313位上含有一个Gln残基而不是Asn残基，而Q329衍生物在野生型酶原329位上含有一个Gln残基而不是Asn残基。这些Q313和Q329衍生物缺少一般情况下与野生型分子的这些位点上的Asn残基相结合的碳水化合物结构，因此这些衍生物的酰氨水解活性和功能活性增强。

本发明涉及经过修饰的人蛋白质C的衍生物，这些修饰作用是：将天然人蛋白质C分子的313位氨基酸从天冬酰胺改变为谷氨酰胺;将天然人蛋白质C分子的第167位氨基酸从天冬氨酸改变为苯丙氨酸;将天然人蛋白质C分子的172位氨基酸从天冬氨酸改变为天冬酰胺。也可以通过将天然人蛋白质C分子的329位上的野生型天冬酰胺残基改变为谷氨酰胺残基而修饰这些分子。329位残基的变化只能与313位残基的变化同时发生，或者也可以与167位和172位残基的变化同时发生。所说的人蛋白质C衍生物比野生型人蛋白质C分子或任何其他人蛋白质C衍生物更易受凝血酶激活，并具有更强的功能活性。

本发明也公开并要求保护用于制备新的人蛋白质C衍生物的重组DNA构建体、载体和转化体。此外，还公开和请求保护含有有效量的本发明人蛋白质C衍生物和一种或多种可药用赋形剂的药物组合物，以及使用这些衍生物治疗和预防疾病的方法。

为了在本文中公开和请求保护的本发明的目的，下列术语和简写定义如下。

Q313-一种人蛋白质C衍生物，其中已将天然人蛋白质C分子313位上的天冬酰胺残基改变为谷氨酰胺残基。

Q329-一种人蛋白质C衍生物，其中已将天然人蛋白质C分子329位上的天冬酰胺残基改变为谷氨酰胺残基。蛋白质C衍生物Q313和Q329由Gerlitz等人（欧洲专利申请91301446.0）和Grinnell等人（J.Biol.Chem.226：9778-9785，1991）公开，这些文献的内容引入本文作为参考。

Q3Q9-一种人蛋白质C衍生物，其中已将天然人蛋白质C分子313位的天冬酰胺残基改变为谷氨酰胺;将天然人蛋白质C分子的329位的天冬酰胺残基改变为谷氨酰胺残基。

F167-一种人蛋白质C衍生物，其中已将天然人蛋白质C分子167位的天冬氨酸残基改变为苯丙氨酸。蛋白质C衍生物F167由Bang等人（欧洲专利申请88312201.2）和E  hrlich等人（EMBO  J.9：2367-2373，1990）公开，这些文献引入本文作为参考。

LIN-一种人蛋白质C衍生物，其中天然人蛋白质C分子172位的天冬氨酸残基已改变为天冬酰胺残基。