[发明专利]制备减毒水痘-带状疱疹病毒疫苗的方法

权利要求书

1．一种制备活的水痘-带状疱疹病毒(VZV)疫苗的方法，该方法包括：

a．在足以使细胞高度复制的高营养条件下，将选自人二倍体细胞的VZV易感染细胞培养至在单层培养物中会合，并供给不能代谢的二糖；

b．在尽可能接近会合点时，用实用范围内尽可能高感染复数的VZV感染细胞感染步骤(a)培养的细胞；

c．将VZV感染培养物在高营养状态下维持22-96小时，并在感染性VZV产量达到峰值时收集；

d．在收集VZV感染细胞前，用任选含有溶酶体营养剂如氯化铵或氯喹的生理溶液洗涤VZV感染培养物；

e．将VZV感染细胞收集到最小体积的稳定溶液中，并且或者立即破碎细胞，或者冷冻这些细胞供以后破碎；

f．破碎VZV感染细胞以最适地释放细胞结合的VZV，并除去细胞碎片，以提供无细胞VZV制备物；

其中VZV易感染细胞是MRC-5细胞，减毒VZV是水痘-带状疱疹病毒的Oka株，培养温度是在30-37℃之间，二糖是以20-60mM提供的蔗糖；培养温度是35℃，感染复数是1∶25和1∶625之间，溶酶体营养剂是以20-50mM提供的氯化铵或以230μM提供的氯喹。

2．制备活的减毒无细胞水痘-带状疱疹病毒疫苗的方法，该方法包括：

a．培养VZV易感染细胞至会合，其中所说培养包括：

1)细胞植入期；

2)在实用范围内尽可能大体积的基本培养基或较小体积的高营养培养基中进行的细胞生长期；

3)感染前期，包括使细胞与无毒的不能代谢的二糖接触；

b．在尽可能接近会合点时，用实用范围内尽可能高感染复数的减毒VZV感染细胞感染步骤a培养的细胞；

c．将VZV感染培养物维持于大体积的基本培养基或较小体积的加富培养基中22-96小时，达到峰值VZV产量；

d．在收集前用任选含有溶酶体营养剂的生理溶液洗涤VZV感染培养物；

e．用以下方法收集VZV感染培养物：

1)移出液体；

2)加入最小体积的稳定剂溶液；

3)刮落或用化学方法释放VZV感染细胞；

4)任选地将释放出的VZV感染细胞在-70℃下冷冻；

f．破碎释放出的VZV感染细胞以最适地释放细胞结合的VZV，并除去细胞碎片，并任选地冻干无细胞VZV或以液体冷冻形式贮存；

其中VZV易感染细胞是MRC-5细胞，减毒VZV是水痘-带状疱疹病毒的Oka株，培养温度是在30-37℃之间，二糖是以20-60mM提供的蔗糖；培养温度是35℃，感染复数是1∶25和1∶625之间，溶酶体营养剂是以20-50mM提供的氯化铵或以230μM提供的氯喹。

3．权利要求1的方法，其中高营养培养基是任选地添加0.02-0.4mg/ml大豆类脂的SRFE-2，并且病毒是通过声波处理或DOUNCE匀浆或两者并用而从细胞中释放出来的。