[发明专利]人体及动物组织简便快速石蜡切片法

说明书

本发明人体及动物组织简便快速石蜡切片法，属于生物学显微切片技术领域，特别适用于要求快速完成的病理切片。

背景技术，在“实用生物学制片技术”，曾小鲁主编，高等教育出版社1989年5月出版书中介绍了各种制片方法，其中应用最广泛的是石蜡切片法，其染色又以HE（苏木精、伊红）染色最为普遍。

常规石蜡切片法，其操作流程是组织块固定、脱水、透明、侵蜡、包埋、切片、粘片、烤片、脱蜡、复水、染色、脱水、透明、封片。其方法是先切片后染色。其不足之处是操作步骤多而繁杂，所用器皿多，消耗酒精也多。

另外用于动物材料的组织块整块染色石蜡切片法，其操作流程是组织块固定、整块染色、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、粘片、烤片、脱蜡、封片。其方法是：组织块整块染色后再切片，它在操作程序上比常规石蜡切片简化。其不足之处，固定和染色不能同时进行，染色全过程时间长，约需要5天以上（包括染色前后处理）。所以该法用于一般组织细胞学观察或标本片的工厂化生产尚可，但不适用于要求快速完成的病理切片。

经国内外专利文献检索，对人体及动物组织石蜡切片法，尚没有发现简便快速的新方法。

本发明目的，为了克服现有技术不足之处，为人体及动物组织切片提供一种操作简便，制片速度快、制片清晰度易保证的石蜡切片法，为医院等部门简便、快速确诊提供条件。

本发明人体及动物组织简便，快速石蜡切片法，其操作全过程的步骤是：取材→固定并染色→无级脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→粘片→烤片→脱蜡→蓝化→复染→封片，其特征在于：

1）固定染色液的配制是用甲液和乙液按体积等量混合而成。其中：甲液配制：将0.5克硫酸铁铵溶于10毫升蒸馏水中，再加入90毫升冰醋酸，配成后置常温下保存备用。

乙液配制：将1克苏木精溶于100毫升纯甲醇中，配成后置常温下，令其自然熟化备用。

2）固定染色后的组织块，直接用无水酒精脱水。

3）固定染色液是本发明切片法的根本和核心，使用前临时将甲液和乙液混合就用。若乙液配成时间较短（一个月内），使用时加入0.2%重量百分比浓度的碘酸钠溶液，其加入量占固定染色液体积的2%，可使苏木精迅速熟化。

甲液和乙液混合后的固定染色液，既是固定剂，又是染色剂，使组织块在固定在同时就进行苏木精染色。

固定染色液作为固定剂来说，甲醇和冰醋酸混合使用，渗透快、固定彻底。

固定染色液作为染色剂来说，苏木精为核染料，硫酸铁铵为媒染剂，在它们共同作用下，使细胞良好着色，而其中的冰醋酸又可防止胞浆着色，故不需分色，从而使固定，染色一步完成。

这种固定染色液，将组织块细胞核内的染色质，核仁被苏木精染成褐黑色，而细胞质不着色或着色极浅，这是制片质量的关键。本发明通过对固定染色液的适当配制，使制片清晰度得到理想的效果。也就是说依靠固定染色液的技术本身使染色质量得到了保证，而不是依靠工作者的经验来实现，这使操作简便、省心。而其他苏木精染色法，主要是靠工作者的经验和技巧来保证染色的质量。

本发明固定染色液，还可用于已经过固定好的保存材料的组织块染色。例如对保存于10%甲醛中的人体或动物组织的染色，效果也很好。

蓝化步骤中蓝化溶液的配制：将氨水滴入纯酒精或纯甲醇中，使其pH为7.5，即成蓝化溶液。

切片蓝化步骤是在切片脱蜡之后进行，通过蓝化将细胞核染成的褐黑化变成蓝黑色。将脱蜡后的切片放入本发明的蓝化溶液中7分钟就完成蓝化，蓝化时间短而效果好。

复染步骤中复制伊红液原液配制：将伊红（Y或B）0.5克溶入3毫升蒸馏水中，再一滴一滴的加冰醋酸，边加边搅动，有沉淀生成至浆糊状时，再加入蒸馏水数毫升，继续滴入冰醋酸至沉淀不再增加。过滤，将沉淀物连同滤纸一起置50-60℃烘箱中烘干。取0.1克沉淀物溶于35毫升甲醇中，即为复制伊红液原液，保存备用。

复染步骤是在切片蓝化后进行。复染主要是染胞浆用的。复染时将蓝化后的切片用伊红滴染液滴液2-3秒种，复染完毕。本伊红滴染液，扩散渗透快，染色快而均匀。常规法是用95%酒精溶解伊红，复染不均匀。

本发明人体及动物组织简便快速质优石蜡切片法，使用固定染色液固定并染色，再通过蓝化和伊红滴染液复染，提高了制片质量的清晰度，最后染色结果：核内染色质和核仁呈蓝黑色，胞浆呈桔红色，对比明显，染色清晰，达到了标准的HE染色效果。