[发明专利]BPI-免疫球蛋白融合蛋白质

说明书

本发明是1992年5月19日申请的共同待批美国专利申请No.07/885，911的后续申请。

本发明总的来说涉及用于治疗人体细菌感染的重组杂交融合蛋白质，编码这种蛋白质的DNA顺序，制备该蛋白质的重组方法，和含有该重组产物的药物制剂。本发明的杂交融合蛋白质是编码杀菌/通透性增强蛋白质或其生物活性片段的DNA和编码一个或多个免疫球蛋白重链恒定区之DNA的直接转录融合的表达产物，该融合体已经被掺入到合适的质粒载体中并转染或转化到宿主细胞中。重组产生的BPI-免疫球蛋白融合蛋白质表达产物（以下称为“rBPI-Ig”）可用作内毒素结合蛋白和杀菌剂。

杀菌/通透性增强蛋白质（以下称为“BPI”）是一种与细菌脂多糖（以后称“LPS”）的脂A部分结合的阳离子蛋白质。BPI蛋白质与细菌LPS的结合可以增强敏感性革兰氏阴性细菌的包膜通透性[Ooi，et  al.，J.Biol.Chem.，262：14891（1987）]。BPI也与可溶性LPS结合。通过酸提取并结合离子交换层析或大肠杆菌（E.coli）亲和层析已从多形核中性白细胞（以下称为“PMNS”）中分离出人BPI蛋白质（Elsbach，et  al.，J.Biol.Chem.，254：11000（1979）;Weiss，et  al.，Blood，69：652（1987））。

从人PMNs中分离的完整BPI蛋白质对革兰氏阴性细菌具有广谱的强杀菌活性（Elsbach，et  al.，J.Biol.Chem.，254：11000（1979））。这种抗菌活性似乎与分离的人全BPI蛋白质的氨基末端区有关。相反，分离的人BPI蛋白质的C-末端区只表现出少许可检测出的抗菌活性（Ooi，et  al.，J.Exp.Med.，174：649（1991））。已经克隆出编码BPL的人DNA，并推断出所编码蛋白质的氨基酸顺序（Gray  et  al.，J.Biol.Chem.，264：9505-9509（1989）;美国专利No.5，198，541）。

免疫球蛋白包括一个具有许多相似结构但重要结构不同的蛋白家族，这些不同的重要结构导致不同的抗原结合特性和其他生物学活性。例如，IgG同型抗体具有最长的血清半衰期并且易于穿过胎盘。最强的抗病毒活性与IgA同型抗体有关;而IgM同型抗体具有最大的抗菌效率（Stites，et  al.，Basic  and  Clinical  Immunology，P.32（Appleton  &  Lange，6th  ed.1987））。在免疫球蛋白家族中的每个抗体同型中还存在着几种亚类和异型变异体（文献同上）。

所谓“免疫球蛋白基因总家族”的成员一般都具有细胞外区，该区域的特征在于因二硫桥键形成而成多个环。这种成环出现在免疫球蛋白分子的重链恒定区中（命名为CH1，CH2，CH3和CH4）。也存在具有与免疫球蛋白总家族成员中的多成环区同源的多成环区的非免疫球蛋白化合物，这些化合物中的某些已被称为“粘着物”（如参见PCT申请No.Wo  89102922，公布于1989年4月6号;Capon  et  al.，Nature，337：525-531（1989））。