[发明专利]生物素的生产方法，斯芬克斯小杆菌属微生物及其应用

说明书

本发明涉及生物素的生产方法以及该方法中所使用的微生物。

生物素是一种维生素，是人类、动物、蔬菜和某些种类的微生物所需要的。作为使用微生物生产生物素的方法，存在着使用微生物的多种已知方法，例如使用链霉菌属或小单孢菌属(JP-B 41-21756)、掷孢酵母菌属(JP-B 42-3074)、芽孢杆菌属(JP-A 56-160998)、埃希氏杆菌属(JP-A 61-149091)、沙雷氏菌属(JP-A 2-27980)和短杆菌属(JP-A 3-240489)的方法。

不过，由于这些微生物产生生物素的产量低，这些常规方法并不总是令人满意的。因此，需要开发一种使用高效率微生物生产生物素的方法，以适应于工业规模的生物素生产。

在这些情形之下，本发明的发明人在自然界和保存在有利于微生物贮藏的典型培养物保藏所中广泛寻找了具有增加的生物素生产能力的微生物。结果，他们发现斯芬克斯小杆菌属的微生物可以在培养基中积累大量的生物素，，从而完成了本发明。

这样，本发明提供了一种生物素的生产方法，其特征在于：在适当的培养基中培养一种能产生生物素的斯芬克斯小杆菌属的微生物和收集培养基中积累的生物素。本发明还提供了该方法中所使用的多种微生物。

本发明方法中所使用的微生物是斯芬克斯小杆菌属的微生物，该属具有产生生物素的能力，其例子有S.adhaeshiva、S.parapaucimobilis和S.paucimobilis。在这些微生物中，斯芬克斯小杆菌SC-42405是优选的。通常，斯芬克斯小杆菌属的微生物具有以下特点：

1.它们是革兰氏阴性杆菌；

2.它们在触酶试验中呈阳性；

3.主要形成黄色菌落；

4.它们含有作为磷脂的斯芬克斯脂类；

5.类异戊二烯醌类型是Q10；

6.它们含有作为细菌脂肪酸的2-羟基酸类；

7.其DNA中G+C的摩尔百分比为60～70不等。

斯芬克斯小杆菌SC-42405是一种由发明人从日本大分县的土壤中分离的细菌中分离出来的微生物，发现它能够在培养基中积累大量的生物素。这种微生物已按照布达佩斯条约贮存在工业科学及技术机构中的发酵研究所(更名为“国家生物科学和人类技术研究所”)中，保藏日为1992年9月3日，登记号码为FERM BP-3995。该微生物也已在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)保藏，保藏日为1993年8月9日，保藏号为M93037。斯芬克斯小杆菌SC-42405的细菌学特征如下：(a)形态学    

1.细胞形状与大小

形状：杆状

大小：0.4-0.8μm×1.5～3.0μm

2.多形性：无

3.游动性：活泼、极性及围毛性鞭毛

4.孢子形成：无

5.革兰氏染色：阴性

6.抗酸性：无

(b)生长性质

1.营养琼脂平板培养：圆，凸，黄色

2.营养琼脂斜面培养：平滑表面，略带光泽，黄色

3.营养肉汤液体培养：混浊生长

4.营养肉汤明胶穿刺培养：不液化

5.石蕊牛乳：无变化

(c)生理学特性

1.硝酸盐还原作用(营养肉汤硝酸盐培养基)：-

2.反硝化作用：-

3.MR试验：-

4.VP试验：-  

5.吲哚形成：-

6.硫化氢形成：+

7.淀粉水解作用：-    

8.柠檬酸利用

科泽氏培养基：+

克里斯坦森培养基：+

9.无机氮源利用

铵盐：+

硝酸盐：+

10.色素形成

细胞色素：+(黄色)

水溶性色素(金氏A型培养基)：-

水溶性色素(金氏B型培养基)：-

11.脲酶：±

12.氧化酶：+

13.触酶：+

14.生长条件

pH值：5.1～7.9

温度：10～33℃

15.对氧气的反应：略偏重需氧性

16.氧化-发酵试验：发酵(弱)

17.来自糖的酸及气体形成