[发明专利]一种血痕鉴定试剂及其制备方法

说明书

本发明涉及的是一种用于鉴定血痕种属的试剂，以及制备这种试剂的方法。

目前国内外法医界鉴定伤害、杀人等案件中的现场和凶手身上粘有的血痕时，需把血痕送到实验室，用抗人血色素血清（下简称抗人Hb）来鉴定是人血还是动物血（即血痕种属），以便认定犯罪事实，这种抗人Hb血清的制取方法是，采取多人静脉采血，提取红细胞，将红细胞经生理盐水洗涤，离心，彻底去除血清成份。加10倍蒸馏水，然后放置于浓度在4℃左右的冰箱内，24小时后完全溶血，再加入纯氯化钠（NaCl）结晶，配成0.85%的溶液，再经离心机10000转/分离心去除红细胞膜即得到10%血红蛋白免疫原。取上述10%血红蛋白免疫原液0.2ml，每隔两日注射于家兔眼结膜下，共注射6次，家兔休息7天，从其心脏抽血。将兔血置于37℃温箱内15分钟，后再放置到4℃冰箱内12小时，使血液凝固折出血清，离心去除沉淀，取上清液即制得了抗人Hb血清。使用抗人Hb血清来进行血痕鉴定方法有1）环状沉淀试验，操作时先将抗人Hb血清加入φ0.2cm沉降管内，用生理盐水浸泡血痕后再将浸泡液加入沉降管内观察环状沉淀（沉淀环）。这种方法操作时间需30分钟以上，灵敏度差，血痕的消耗量也大，最少消耗量为0.2mg，而且还不易操作。2）免疫单扩散试验，先配制PH8三羟甲基氨基甲烷一盐酸缓冲液，再配成1%琼脂液，隔水煮沸溶解琼脂，在56℃恒温条件下与抗人Hb血清混合后辅成胶板，再将血痕埋入胶内，2小时后观察沉淀晕环，这种鉴定方法操作时间长，达3小时以上，血痕最少消耗量为0.1mg。3）对流免疫电泳方法，先配制乙二基巴比妥缓冲液（PH8.6），再配成1%琼脂糖胶板，胶板上打孔（φ0.3cm），将抗人Hb血清放入阴极孔，将血痕浸泡液放入阳极孔，电压100V，电流10mA，电泳40分钟，观察沉淀弧线，此法不仅需要电泳仪，电泳槽等仪器设备，基层政法部门的法医室无法普及，而且其操作步骤复杂，时间长达4小时以上，血痕的最少消耗量为0.1mg。4）其它方法还有免疫双扩散试验，免疫火箭电泳试验等，因其灵敏度低，法医界已不采用。因此采用现有抗人Hb血清来进行血痕鉴定存在着效价低，通常在2万倍以下，灵敏度不高，血痕消耗量大，平均消耗量在0.5mg，最少消耗量为0.1mg，并且鉴定血痕的方法烦锁，时间长，需仪器设备和多种试剂等不足。

本发明的目的是为了克服上述存在的不足，提供一种快速鉴定血痕种属且鉴定方法简单的血痕试剂，以及制备这种血痕试剂的方法。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，将抗人血色素血清和聚乙二醇在三羟甲基氨基甲烷-盐酸组成的缓冲液中混合，其各重量百分配比是抗人血色素血清66.67%，聚乙二醇2.83-4.17%，三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液29.16-30.5%。

本发明所述的血痕试剂的各重量百分配比为抗人血色素血清66.67%，聚乙二醇3.5%，三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液29.83%。

一种制备上述血痕试剂的方法，它是先将8.5-12.5%的聚乙二醇加入到87.5-91.5%PH7.5-8.5的三羟甲基氨基甲烷-盐酸的缓冲液中，此混合液再与抗人血色素血清按1∶2比例混合（重量百分比），成为粗制血痕试剂;将上述粗制血痕试剂置于温度在1-8℃的环境下冷处理24小时，使血清内可溶性的免疫复合物（2C）沉淀，然后将冷处理后的粗制血痕试剂装入试管内，通过3000-10000转/分速度近20分钟的离心过程，使沉淀物离心至试管底部，最后吸取清晰的上清液，即获得血痕试剂。

前述制备血痕试剂的方法，选择PH为8的三羟甲基氨基甲烷-盐酸作为缓冲液，将粗制血痕试剂置4℃温度环境下冷处理24小时，并用离心机3000转/分的速度进行离心过程为最佳。

以上制备方法中所述的抗人血色素血清，聚乙二醇、三羟甲基氨基甲烷-盐酸的各组分以前述重量百分比为准。

本发明与原有的抗人血色素血清相比较，具有高效价，高灵敏度的独有特点，其效价为5万倍以上，最少可鉴定0.01mg血痕，且特异性强，不与动物血痕起反应，鉴定血痕种属的方法快速、微量、简便，只需2分钟就可鉴定完成，可携带到发案地点进行现场鉴定，不需仪器设备，使用极为方便，特别是这种血痕试剂可进行独有的《玻片法》滴定血痕种属，具有较好的经济和社会效益。