[发明专利]内皮素配体和基因调节序列介导的特异性基因转移技术

说明书

本发明属生物高技术。

基因转移技术是生物治疗和工程的关键方法。目前国内外应用转基因方法主要有物理、化学、融合和重组病毒转染四类方法。这些方法有的转染效率低，有的安全性差，均缺乏细胞和组织的特异性等缺欠，从而限制了生物工程和治疗的应用。因此，寻求一种高效、安全、具有细胞和组织靶向性的新的转基因技术，已经成为生物工程和治疗的一个关键问题。近年来，有人用细胞和组织上的特异抗体，作为生物治疗的导向或归巢装置，但这种方法是非生理性，反复应用易产生免疫反应。

本发明的目的在于寻找一种效率高、特异性好、用途广泛的转基因方法。

本发明的内容是应用内皮素配体（包括激动剂和阻断剂）和/或内皮素基因5′端调控序列重建的内皮素-多聚赖氨酸-基因复合物和构建的具有内皮素5′端调控序列的携带有目的基因的逆转录病毒载体、腺病毒载体等，特异性向血管内皮细胞、平滑肌细胞离体和在体的转基因技术。

其原理是：内皮素是内皮细胞产生的一种生物活性多肽，其内皮素5′端含有组织特异性调节序列，可以调控基因选择性地在内皮细胞中表达。

内皮素具有A、B两种受体，A型受体主要分布在平滑肌细胞上，B型受体主要分布于内皮细胞。当受体与配体结合后，可以通过胞饮机制将配体转输到细胞内，而达到基因治疗的目的。

应用基因重组的方法，将内皮素5′端调节序列（包括启动子、增强子）与目的基因重组，构建成病毒载体（逆转录病毒载体、腺病毒载体等），通过包装细胞，形成含有内皮素调控序列和目的基因修饰的假病毒转染的体细胞，可以使目的基因特异性地在内皮细胞中表达。

应用双相偶合剂，将不同内皮素受体配体与多聚赖氨酸或丝氨酸联结，再通过氢建结合，与目的基因联结，组建成内皮素受体配体-多聚赖（丝）氨酸-目的基因的复合体。这种复合体再通过物理、化学、脂质体介导的或直接转基因的方法，转染体细胞。由于所用受体配体类型不同，因此可将外源性的目的基因特异性地导入内皮细胞或平滑肌细胞中。

所携带的目的基因可依据治疗目的的不同，可选用治疗肿瘤的IL-2、TNF、GM-CSF、γ-INF等，亦可选用治疗心血管疾病的LDL-R、tPA、ProUK、EPO等，亦可选用治疗其他疾病的有关基因及其反义DNA。

内皮细胞覆盖全身所有组织、器官的血管内膜，平滑肌细胞遍布全身血管组织，其分布广，面积大，其分泌产物不仅可以在局部起到自分泌和旁分泌作用，亦可通过体循环作用于远隔器官，因此，内皮细胞和平滑肌细胞是进行生物治疗的理想中介细胞。

本方法可以选择性地将各种外源性基因特异性地转染至内皮细胞或平滑肌细胞，具有广泛的应用价值。它可应用于肿瘤、心血管病、呼吸系统疾病、血液病、肾疾病、遗传病的基因导向和生物治疗。