[发明专利]预防嗜水气单胞菌病氢氧化铝菌苗及制备方法

说明书

本发明属于一种预防甲鱼疾病的疫苗，特别是预防甲鱼出血性败血症的菌苗及制备方法。

甲鱼，学名中华鳖。其肉营养丰富，味道鲜美，高蛋白，低脂肪，为补养健身的高级滋补品，人工养殖能带来极高的经济效益。人工喂养甲鱼，危害最大的是疾病的干扰。甲鱼有传染病（主要是嗜水气单胞菌病）、寄生虫病、真菌病、代谢病等，当前危害最严重的为嗜水气单胞菌病。病甲鱼背部溃烂、底板出现红晕、头部颈部肿胀、充血，眼失明，烂爪甚至脱落，内脏各脏器出血、充血、水肿，呈现败血症状，青霉素、链霉素治疗均不奏效。该病发病率高，传染快，死亡率高，招之疾病漫延，会使整池鳖死亡。

本发明的目的是提供一种预防甲鱼嗜水气单胞菌病的菌苗及其制备方法，用于预防甲鱼患嗜水气单胞菌病，确保人工养殖甲鱼的健康发展。

本发明的技术方案是这样实现的：预防甲鱼嗜水气单胞菌病的菌苗的制备包括如下步骤：

a、菌种的提取。选择具有嗜水气单胞菌病症状的病甲鱼，解剖病甲鱼，取出肝脏后剪破，在病变组织上取菌，培养，24小时后，按细菌学分类法和检索表程序鉴定，定为嗜水气单胞菌；

b、菌种培养。从嗜水气单胞菌中筛选出毒力强，形态、培养特性和生化反应典型的菌株为菌种，接种到平板培养基上，在温箱中培养；

c、制备营养肉汤。在1000mL蒸馏水中加入5克氯化钠、5克牛肉浸膏、1克磷酸氢二钾、10克蛋白胨，加热至沸腾，透明，放凉后，加入50mL新生牛血清；

d、种子肉汤的培养。每100mL营养肉汤中加入5个典型菌落制成种子肉汤进行培养；

e、生产肉汤的培养。在每100mL营养肉汤中加入1-2mL种子肉汤制成生产肉汤进行培养；

f、生产肉汤的灭活。以每100mL培养后的生产肉汤加入1mL36%的甲醛溶液，放入温箱中进行灭活；

g、嗜水气单胞菌氢氧化铝菌苗的配制。以每100ml灭活的生产肉汤加入20ml高压灭菌后的氢氧化铝凝胶，边加边摇匀，让其自然沉淀，待溶液分层后抽取上面的清液20ml，剩余的部分即为嗜水气单胞菌氢氧化铝菌苗。

经实验证明，注射该菌苗后的甲鱼体内均产生了抗体，再无嗜水气单胞菌病的出现，预防效果显著。

菌种培养的温度为25～35℃，时间为24小时。

种子肉汤的培养温度为25～35℃，优龄时间为12～18小时。

生产肉汤的培养温度为25～35℃，时间为36～48小时。

生产肉汤的灭活温箱温度为25～35℃，时间为24小时。

甲鱼嗜水气单胞菌病（出血性败血症），是一般抗菌素，难以对付的疾病，本品的研制是利用生物技术达到预防和治疗甲鱼疾病的目的，填补国内空白，是日前甲鱼养殖业的最佳抗菌制剂，具有明显的疗效，可促使甲鱼养殖业更上一个新台阶，健康发展。