[发明专利]非还原性糖类生成酶及其制备和应用

权利要求书

1、一种酶，当其作用于还原性淀粉部分水解产物时生成具有海藻糖结构的非还原性糖类。

2、如权利要求1所述的酶，其特征在于上述非还原性糖类的海藻糖结构位于其末端单元，而上述还原性淀粉部分水解产物是一种或多种具有3个或3个以上葡萄糖聚合度的还原性淀粉水解产物。

3、如权利要求1所述的酶，其特征在于它来自一种微生物。

4、如权利要求3所述的方法，其特征在于所述微生物是根瘤菌属（Rhizobium）、节杆菌属（Arthrobacter）、短杆菌属（Brevibacterium）、黄杆菌属（Flavobacterium）、微球菌属（Micrococcus）、Curtobacterium属、分枝杆菌属（Mycobacterium）和Terrabacter属及其突变体中的一员。

5、如权利要求1所述的酶，它具有如下物理化学特性：

（1）作用

当作用于一种或多种具有3个或3个以上葡萄糖聚合度的还原性淀粉部分水解产物时，生成具有海藻糖结构的非还原性糖类;

（2）分子量

在用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）时，约为76，000-87，000道尔顿;

（3）等电点（PI）

在用两性电解质等电电泳时约为3.6±4.6;

（4）最适温度

在pH7.0、培养60分钟时约为35-40℃;

（5）最适pH

在40℃培养60分钟时约为6.4-7.2;

（6）热稳定性

在pH7.0培养60分钟时，在高达35-40℃的温度下是稳定的;

（7）pH稳定性

当在25℃培养16小时时，在pH5.5-11.0范围内是稳定的。

6、如权利要求1所述的酶，它具有下列一种或多种部分氨基酸序列：

（1）X₁-Arg-Thr-Pro-X₂-Ser-Thr-Tyr-Arg-Leu-

（其中符号“X₁”表示Val或Met，“X₂”表示Ala或Val）;

（2）Gly-Val-Glu-Asp-Thr-Ala-Phe-Phe-Arg-Tyr-;

（3）Leu-Val-Glu-Leu-Thr-Met-Pro-Gly-Val-Pro;

（4）Glu-Gly-Arg-X₃-Ser-X₄-Tyr-Ala-X₅-Ala-

（其中符号“X₃”表示Gly或Glu;“X₄”表示Pro或Arg;“X₅”表示Val或Glu）。

7、如权利要求2所述的酶，其特征在于所述非还原性糖类是一种由下式所表示的α-糖基海藻糖：

Gn-T

其中，符号“G”表示葡萄糖残基;“n”一个或多个整数;“T”表示α，α-海藻糖残基。

8、一种制备权利要求1中酶的方法，包括在一种营养培养基中培养一种能产生这种酶的微生物;和从所得培养物中回收这种酶。

9、如权利要求8所述的方法，其特征在于所述微生物是根瘤菌属、节杆菌属、短杆菌属、黄杆菌属、微球菌属、Curtobacterium属、分枝杆菌属和Terrabacter属及其突变体中的一员。

10、一种能产物权利要求1所述酶的微生物，它是从根瘤菌属和节杆菌属中选择的。

11、如权利要求10所述的微生物，其特征在于上述根瘤菌属的微生物是Rhizobium Sp.M-11（FERM BP-4130）及其突变体。

12、如权利要求10所述的微生物，其特征在于上述节杆菌属微生物是Arthrobacter Sp.Q36（FERM BP-4316）及其突变体。

13、一种降低还原性淀粉部分水解产物的还原力的方法，包括用权利要求1所述酶作用于含有一种还原性淀粉部分水解产物的溶液的步骤。