[发明专利]阿弗麦菌素的生产与分离

说明书

本发明涉及阿弗麦菌素(avermectines)生产与分离的方法。更具体地说，本发明涉及A_1a、B_1a和B_1b类阿弗麦菌素，尤其是B_1a类阿弗麦菌素的分离。阿弗麦菌素是一组细菌代谢物，正如德国专利2717040中所描述的，它们是由产生这些化合物的菌株发酵得到的。还涉及具有杀寄生虫活性能力、符合结构(I)(如图1所示)的大环内酯，并且这些各自不同的成分是：

阿弗麦菌素A_1a  R₁＝C₂H₅    R₂＝OCH₃

          B_1b  R₁＝CH₃      R₂＝OCH₃

          B_1a  R₁＝C₂H₅    R₂＝OH

          B_1b  R¹＝CH₃     R₂＝OH

人们知道，为了分离细菌代谢物，有可能使用合成的高交联树脂之类的吸附剂，如专利US4399274中所描述。根据该专利中使用的技术，用交联共聚物处理菌丝体提取物。

现在发现，不是从提取物中，而是从整个发酵液中用两种特定类型的树脂处理比较容易分离阿弗麦菌素：

a)聚丙烯酸酯，它与US4399274描述的树脂不同，不是共聚物；

b)酚-醛缩聚共聚物，它与US4399274描述的树脂不同，该树脂没有官能团，所述共聚物有弱碱性官能。

还发现，使用上述两类树脂中一类树脂时，有可能引向优先制取A_1a和B_1b类阿弗麦菌素的分离方法。

因此，本发明的内容是阿弗麦菌素的分离方法，其特征在于：在与水混溶的溶剂存在下，将产生阿弗麦菌素的Streptomyces avermitilis培养液得到的整个发酵液化，用选自于聚丙烯酸酯和酚-醛缩聚共聚物中的树脂处理这样得到的均化物，利用水/与水混溶的溶剂混合物梯度将吸附在树脂上的阿弗麦菌素游离。

在发酵结束后，将整个发酵液与适当体积的与水混溶的有机溶剂(例如丙酮、甲醇、异丙醇)混合。上述混合物再倒入均质器以便破坏细胞并有利于提取阿弗麦菌素。均质化的物质不经过滤或离心处理直接逆流装入柱中，柱中装有聚丙烯酸酯(如Amberlite^XAD-8或Diaion^HP)或酚-醛缩聚共聚物基体树脂。其树脂用水/溶剂混合物梯度洗涤。采用水/与水混溶的溶剂混合物梯度洗脱已吸附的阿弗麦菌素，该溶剂不必是吸附中使用的相同溶剂。

在使用合适梯度的同时，有可能分离许多阿弗麦菌素。

本发明的分离方法可用于由任何产生阿弗素菌素的菌株得到的发酵液。由新微生物streptomyces avermitilis得到的发酵液特别有利，该新微生物样品寄存在俄罗斯科学院-微生物生物化学和生理学研究所(Puschchino，莫斯科地区)培养物永久保存，其登记号为VKM AC-1475D。菌株VKM AC-1475D是本发明另一方面。经过发酵菌株在此产生有阿弗麦菌的细胞内混合物，其中主要组分是B_1a和A_1a阿弗麦菌素，前者的百分数为18-26％，后者为10-15％。

Streptomyces avermitilis VKM AC-1475D的形态学特征和培养物特征如下：孢子产生物形成具有突出的圆锥中心部分的灰-褐色菌落，通常在整个表面复盖培养介质。在菌落四周有一白边，其他菌落很少出现。

在有机琼脂、Pridham-Gottlieb琼脂、甘油-硝酸盐琼脂、无机琼脂、葡萄糖-天冬酰胺琼脂、燕麦粉琼脂、葡萄糖-硝酸盐琼脂、营养性琼脂上观察到了孢子生成。

有机琼脂

(*)SM：褐黑色    (*)SM＝植物性的培养物

AM：少量灰色      AM＝气生菌丝体

SP：褐黑色        SP＝可溶色素

Pridham-Sottlieb琼脂