[发明专利]鲤微生态制剂及其制备方法

说明书

本发明涉及一种以干酪乳杆菌和节杆菌活体菌粉制成的微生态制剂及其制备方法。该微生态制剂做为一种饵料添加剂，可广泛用于鲤鱼及其它淡水吃食鱼类的人工养殖。

在鱼类病害防治方面，传统的方法是化学疗法或用抗生素类药物，但由于耐药性的产生、抗菌素在鱼体内的积累等已影响了水产品的质量，甚至造成了对人类健康的危害。为此，国内外都在研究生物防治或生态防治技术，以求解决上述问题。国外已有人提出人的养生素，即用活的或死的参与调整人体肠道菌保持肠道生态平衡，促进生长发育，从而间接防治疾病，增进健康。目前国内外在人畜防病治病和保健方面利用乳杆菌，双歧杆菌等开发出一批新的微生态制剂，取得良好效果。在水产养殖方面，也有人用蜡样芽胞杆菌作为鳗鲡开口饵料，提高了鱼苗成活率。但在饵料中添加生态制品的研究报道很少，实际中广泛应用的仍然是以维生素、氨基酸、矿物质等为主要成分的饵料添加剂。

本发明是根据微生态学原理，从正常鲤肠道分离出干酪乳杆菌和节杆菌经传代驯化、发酵繁殖、浓缩干燥制成活体菌粉，并以此为鲤及其它淡水吃食鱼类人工饵料的添加剂，通过鱼类摄食带有活菌制剂的饵料，将活菌体回归鱼体，调整鱼的肠道菌群，使鱼体在最佳状态下生长发育，从而实现防病治病和促进鱼体生长、增重的功效。

本发明提供的两种菌株均是正常鲤肠道内的优势菌。经中科院微生物研究所鉴定，其中一种是干酪乳杆菌鼠李糖亚种（Laecto-bacillus casei subsp rhamnosus），系革兰氏阳性、杆状、单个、成对、成链、无鞭毛、无荚膜及芽胞，兼性厌氧，在Lbs培养基上生长良好，15～45℃生长，37℃最佳，PH值4.0以下、8.0以上生长不良，无内外毒素，编号JY31；另一种是节杆菌（Arthrobater sp）的一个菌种，系革兰氏阳性、杆状、老细胞球状、兼性厌氧、无内外毒素、无芽胞、无鞭毛及荚膜，在NB培养基上生长良好，15～38℃生长，37℃生长最佳。PH值5.0以下8.0以上生长不良，编号JY10。这两株菌已于1994年3月26日送中国微生物菌种保藏管理委员会保藏，保藏号0211（JY10）和0212（JY31）。

本发明所称的鲤微生态制剂，是以JY31和JY10菌株的至少一种活体菌粉组成。混合菌粉中，JY31和JY10的活菌量的最好比例是1：1。其制备方法是将JY31和JY10菌株分别接种于不同营养的培养基上培养，进行传代驯化，然后将驯化的菌种再分别接种于不同的发酵液中发酵培养，经浓缩干燥制成活体菌粉。活体菌粉可以测定数量，使之达到一定的指标，然后将两种菌粉按照1：1的活菌数量比例混合，进行包装。

JY31和JY10菌株的菌种传代驯化可分别先在标准的Lbs，NB琼脂斜面培养基上接种，然后再分别移种于标准的Lbs，NB肉汤培养基，接种量为0.1～1%,22～40℃条件进行，培养时间为24小时。

JY31菌粉的制备可以通过如下步骤完成：（1）将JY31种子液接种于豆芽汤发酵液中发酵，条件是22～40℃、压力0.1mpa、搅拌30-50rpm/分，30～36小时培养，使活菌数达到20～30亿/ml；（2）将发酵液放出，经高速离心机（16000rpm）处理取得菌泥；（3）用含有5%奶粉的无水碳酸钙吸附菌泥水分，充分混合，在60-80℃烤箱内干烤30分钟，再混合、干烤、反复多次获得干燥菌粉。

JY10菌粉的制备是通过如下步骤完成：（1）将JY10种子液接种于豆芽汤发酵液中发酵培养，条件是22～38℃，压力0.1mpa，搅拌60～100rpm/分，培养时间24～36小时，使发酵液的活菌数达到20～30亿/ml；（2）将发酵液放出，经高速离心机（16000rpm）处理取得菌泥；（3）用含5%奶粉的无水碳酸钙吸附菌泥水分，充分混合，在60～80℃烤箱内干烤，反复混合、干烤、制得干燥菌粉。

上述所说的JY31发酵液可以是在5%（以干黄豆计算）的豆芽汤中加入NaCl1%、酵母膏0.3%，KaHPO₄0.1%，NaH₂PO₄0.01%、PH值为6-7，最佳6.5；而JY10发酵液可以是在5%（以干黄豆计算）的豆芽汤中加入NaCl10.5%，葡萄糖1%，牛肉膏0.3%，酵母膏0.3%，PH值为6.5～8，最佳7.5。