[发明专利]用于分子杂交的可溶性共价偶联载体

说明书

核酸的分子杂交（molecular    hybridization），是指利用组成核酸的核苷酸碱基可以形成专一的氢键配对（腺嘌呤与胸腺嘧啶配对，鸟嘌呤与胞嘧啶或尿嘧啶配对）的性质，在人工条件下使具有互补核苷酸序列的单链核酸分子自动形成杂合双链的核酸分子。这种碱基配对的专一性极高，在严格的杂交条件下，只有分子间所有碱基都形成氢链配对的杂交双链能稳定存在。分子杂交分为DNA与DNA、RNA与DNA和RNA与RNA几种;就实验是均相还是多相来说，又分为固相一液相杂交和溶液杂交两大类。就实验目的来说，有分析用杂交和制备用杂交之分。

所有分子杂交实验的结果，都是形成杂合双链核酸分子和单链分子的混合物。由于专一性极高，因此，可被利用来纯化某特定的核酸片段（探针），为此目的，一般做法是将与待分离核酸碱基序列互补的核酸（即探针），预先纯化好，并将它固定在易于分离的载体上，再与溶液中待分离核酸杂交，然后分出载体，载体上即带有与探针杂交的待分离核酸，再加以适当处理（如加热），使杂合双链解离，即可得到纯粹的待分离的核酸。

另一方面，如果两种核酸群体中，某一特定序列的核酸含量不同，也可以用相似的方法，使含量相同的核酸杂交，形成杂合双链，而含量不同的该特定核酸却不能完全形成杂合双链，总有一部分以单链形式留在反应体系中。除去杂合双链，即可得到该特定的单链核酸，这种方法称为“相减杂交”（subtractive    hybridization）。

由此可见，提纯用杂交和相减杂交的共同技术关键，都是分离杂合双链和单链核酸分子。目前，对于前者，一般应用各种固相支持膜，如硝酸纤维素膜、尼龙膜、含活化基团的纤维素膜（Sambrook，Fritsch    and    Maniatis，Molecular    Cloning：A    Laboratory    Handbook，Cold    Spring    Harbor    Laboratory，2nd    edition，1989.）等来固定探针，进行液一固相杂交。这些支持膜一般都需进口，价格昂贵，且液一固相杂交的固有缺点是效率很低。对于后者，目前常用羟基磷灰石柱层析（Sargent    and    David.1983.Differential    gene    expression    in    the    gastrula    of    Xenopus    laevis，Science    222，135。Davis    et    al.1984.Cell    type-specific    cDNA    probes    and    the    murine    I    region;The    localization    and    orientation    of    Ad.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81;2194.）和光敏生物素标记一生物素结合蛋白除去杂合双链（Hsu    Lih-Ching    and    Gould.1993.Cloning    and    characterization    of    overexpressed    genes    in    the    mammary    gland    of    rat    strains    carrying    the    mammary    carcinoma    suppressor    gene.Canc.Res.53，5766.）。这些试剂同样需要进口，价格昂贵，而且对核酸均有一定损害。

本发明的目的，在于发展一种比现有试剂更便利、价廉、高效和实用的杂合双链分离用试剂。