[发明专利]噬菌蛭弧菌生态制剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种具有广谱制菌作用的生态制剂，特别涉及噬菌蛭弧菌生态制剂。

在细菌的微生态环境中，各种菌群之间相互制约、相互依赖、共同生存达到菌群之间的平衡，这种平衡对环境，如水、土壤、食物等，对宿主，如人、动物、植物等，都是至关重要的。一旦这种平衡被破坏，环境将被污染，宿主就将患病。

目前，由于大量使用化学消毒剂，虽然可杀死致病菌，但却造成环境的二次污染，因而给人、动物和植物等带来极大的危害，另外，抗生素在治疗人、畜的细菌性疾病方面有显著的积极效果，但却带来了不容忽视的负面效应。例如：扰乱了正常微生物菌群的生态平衡，使一些疾病久治不愈或二重感染；还会使细菌产生抗药性，新的耐药性菌株的不断出现直接影响预防、治疗效果；并且在畜、禽中大量使用抗生素，使畜、禽制品中药物含量超标，直接影响食用者的健康。

本发明的目的就在于要克服上述缺陷，研制生态制剂，即以噬菌蛭弧菌为主的生态活菌制剂。噬菌蛭弧菌是一种专门以捕食细菌为生的寄生性细菌，它广泛存在于自然水体、土壤中，以及人类与动物的粪便中，并可分离。它具有寄生和裂解不同科属的多种细菌，如沙门氏菌、不凝集弧菌、大肠杆菌、水稻白叶枯病菌等等。它通过酶和自身运动，侵入宿主菌细胞核内，利用核内营养生长、增殖，致使宿主菌细胞破裂，再进入其它宿主菌细胞核内如此反复。本发明的生态制剂正是利用噬菌蛭弧菌的这一特性和其它生物特性，进行细菌性疾病和环境污染的生物防治，从而避免抗生素和化学消毒剂的弊病。

采用本发明生产出来的噬菌蛭弧菌生态制剂广泛应用于防治环境污染、人畜疾病等方面，通过对试验用河水的检测，大肠杆菌群数大幅度下降。通过对防治雏鸡白痢的效果检测，发病率大大下降，取得了预料效果。

实施例1；

1、宿主菌浓缩液的制备

取大肠杆菌C600，或取噬蛭弧菌敏感裂解谱中的其它标准菌株为宿主菌菌种。

(1—1—1)肉浸液培养基

取新鲜牛肉(去除脂肪、肌膜、肌腱)切成小块并绞碎，放人器皿中，加蒸馏水1000ml，混合后置于冰箱中36小时，取出煮沸20分钟，加压过滤，继续煮沸至原量2/3，再加入蛋白胨10克、氯化钠5克，并以蒸馏水补足蒸发掉的水分，加热.加15％氢氧化钠溶液5ml，继续煮沸，矫正PH值7.4至7.6，过滤后放入器皿中，置高压灭菌器经15磅20分钟灭菌。

(1—1—2)营养琼脂

取蛋白胨20克、牛内膏5克、氯化钠5克、琼脂20克、蒸馏水1000ml放入器皿中混合，加热溶解，加15％氢氧化钠2ml，矫正PH值7.4至7.6，煮沸，并置于高压灭菌器内经15磅15分钟灭菌，置于45C恒温水浴箱中30分钟，分装于灭菌9cm平皿中。

(1—1—3)s·s琼脂

取琼脂18克、牛肉膏5克、蒸馏水1000ml放入器皿中混合，加热溶解并过滤，再将蛋白胨5克、乳糖10克、胆盐10克、枸橼酸钠10克、硫代硫酸钠10克、枸橼酸铁0.5克混合后加入到已过滤的琼脂内，摇匀溶解稍加热，矫正PH值至7.1，然后加入0.5％中性红水溶液及0.1％煌绿溶液摇匀，煮沸并置45C恒温水浴箱30分钟后，分装于灭菌9cm平皿中。