[发明专利]用鳞翅目粘虫卵巢细胞制备流行性乙脑疫苗的方法及疫苗

权利要求书

1、一种制备流行性乙型脑炎疫苗的方法，其特征是包括下述步骤：

1)在pH为6．1-7．6的培养液中悬浮培养细胞基质鳞翅目粘虫(Spodoptera frugiperda)的卵巢细胞，使细胞浓度达到10⁵-10⁷／ml；

2)以感染剂量(M．O．I．)为0．01-1．0将流行性乙型脑炎病毒接种到具有上述细胞浓度的细胞基质培养液中，培养3-5天后得细胞培养悬液；

3)低速离心部分细胞培养悬液，取上清液过滤收获病毒；

4)用新鲜培养液补足剩余的细胞培养悬液继续传代培养，3-5天后离心收获病毒；

5)用福尔马林灭活收获的病毒制备灭活疫苗或不经灭活病毒制备减毒活疫苗。

2、根据权利要求1所述的制备流行性乙型脑炎疫苗的方法，其中所述的鳞翅目粘虫的卵巢细胞为Sf9细胞(ATCC CRL 1711)。

3、根据权利要求1或2所述的制备流行性乙型脑炎疫苗的方法，其中流行性乙型脑炎病毒株为P3株或SA14株。

4、根据权利要求1或2所述的制备流行性乙型脑炎疫苗的方法，其中流行性乙型脑炎病毒株为SA14-14-2株。

5、根据权利要求1或2所述的制备流行性乙型脑炎疫苗的方法，其中所述的培养液为有血清培养液，且在步骤4)后附加一超速离心去除残余小牛血清的步骤。

6、根据权利要求1或2所述的方法制备的流行性乙型脑炎疫苗。

7、一种制备流行性乙型脑炎疫苗的方法，其特征是包括下述步骤：

1)在pH为6．1-7．6的有血清培养液中悬浮培养细胞基质鳞翅目粘虫(Spodoptera frugiperda)的卵巢细胞，使细胞浓度达到10⁵-10⁷／ml；

2)以感染剂量(M．O．I．)为0．01-1．0将流行性乙型脑炎病毒接种到具有上述细胞浓度的细胞基质培养液中，培养3-5天后得细胞悬液；

3)将上述感染病毒后的细胞悬液在无血清培养液中经逐步适应传代至其培养液中的血清含量低于0．1％；

4)低速离心部分适应后的无血清培养细胞悬液，取上清液过滤收获病毒；

5)用新鲜无血清培养液补足剩余的细胞培养悬液继续传代培养，3-5天后离心收获病毒；

6)用福尔马林灭活收获的病毒制备灭活疫苗或不经灭活病毒制备减毒活疫苗。

8、根据权利要求7所述的制备流行性乙型脑炎疫苗的方法，其中所述的鳞翅目粘虫的卵巢细胞为Sf9细胞(ATCC CRL 1711)。

9、根据权利要求7或8所述的制备流行性乙型脑炎疫苗的方法，其中流行性乙型脑炎病毒株为P3株或SA14株。

10、根据权利要求7或8所述的制备流行性乙型脑炎疫苗的方法，其中流行性乙型脑炎病毒株为SA14-14-2株。

11、根据权利要求7或8所述的方法制备的流行性乙型脑炎疫苗。