[发明专利]西洋参鲜细胞简易工业化生产方法

说明书

本发明涉及一种植物组织培养技术，特别是西洋参鲜细胞组织培养方法。

西洋参(Panax Quinquefolium L.)主产于美国、加拿大、法国，其特点是性凉，味甘微苦，入心、肺、肾径，有益气养阴、清热生津、调补五脏、大补元气之功效。栽培西洋参，受土壤、气候的限制，条件要求高，产量小且生产周期长，生长4年以上才能收获，价格昂贵。

在应用植物组织和细胞培养技术生产天然药物方面的研究，国内从1964年就已开始，70年代中期昆明植物研究所、医科药物研究所、中国药科大学等单位先后进行了三分三、人参、三七、紫草、西洋参等组织和细胞培养研究，其中以三分三、人参较为成功，但主要是药用成分和药理活性以及建立高产稳产细胞株系的研究，80年代中期，中国药科大学在人参(吉林参)鲜细胞培养方面首次取得成功，并申请了中国专利(CN87102382，2)。继我国人参组织培养技术建立以后，前苏联、日本、美国、印度等国也先后开展了这方面的研究，日本在1973年曾有固体培养人参细胞的报道，1988年2吨罐大量培养获得成功之后，于1989年进行了20吨罐级大量培养的生产试验，正处于产品开发准备时期，但到目前为止，国内外还未见有关西洋参鲜细胞作产品或开发产品的报导。

本发明的目的在于提供一种西洋参鲜细胞组织培养方法，以实现西洋参鲜细胞工业化生产，弥补栽培西洋参生产周期长，产量小，成本高的缺陷，并提高有效物质含量。

本发明所述的西洋参鲜细胞的培养生产方法，经过以下步骤：

(1)配制储备液，储备液的培养基成分及含量为：

  成  分    含量(mg/l)     成    分    含量(mg/l)

  硝酸钾    1700-3500       碘化钾          0.8-1

  硝酸铵       0-1900       钼酸钠        0.2-0.3

  氯化钙      400-500       硫酸铜      0.02-0.03

磷酸二氢钾    170-510       氯化钴      0.02-0.03

  硫酸镁      350-400    盐酸硫铵素B₁    0.7-0.8

  硫酸锰        20-25    盐酸吡哆辛B₂    0.5-0.6

  硫酸锌         7-10       甘氨酸            2-3

 硼  酸         6-8      肌  醇        80-100

硫酸亚铁      27-29    水解乳蛋白    500-1000

吲哚乙酸      1.6-2     吲哚丁酸        1.6-2

 激动素     0.2-0.8      白  糖   40000-50000乙二胺四乙酸二钠  38-40

(2)装瓶：按7-10克/升比例将琼脂溶解于热水中，加入配制好的储备液，充分搅拌后，装入瓶中，液体的厚度约为5-7毫米；

(3)灭菌：密封瓶口，将瓶放入高压灭菌装置中，在温度为115-122℃，压力1.0-1.2kg/cm²下灭菌20-30分钟，冷却后形成固体培养基；

(4)接种，培养：在固体培养基上，无菌条件下接入西洋参鲜细胞种源，然后放入培养室静止暗培养，室内温度控制在24-27℃，30天左右，在固体培养基表层取得西洋参鲜细胞培养物。每升储备液可收获西洋参培养物400-500克(干重25克左右)。

将本发明西洋参组培方法所生产的西洋参培养物与中国药品检验所提供的栽培西洋参标准样品对照，薄层分析，培养物与标样斑点一致，培养物的皂甙含量为13.2％，栽培西洋参含量为8％左右；水溶性总糖含量12-18.3％，高于栽培西洋参；SOD含量为340.7-1022.0U/克·干重；氨基酸总量为14.086％，15种氨基酸的含量如下：

         含量(g/100g)            含量(g/100g)  天门冬氨酸    1.597      异亮氨酸     0.787

苏氨酸      0.669       亮氨酸      1.049

丝氨酸      0.766       酪氨酸      0.291

谷氨酸      3.050      苯丙氨酸     0.851

甘氨酸      0.763       组氨酸      0.765