[发明专利]用于洗涤剂领域的新的脂酶变异体

说明书

本发明涉及修饰的脂酶及其在例如洗涤剂或清洗组合物中的用途。

脂酶是能够水解脂类的酶，它们被广泛用于如脂肪和油类加工、洗涤剂、诊断试剂等领域。

许多微生物生产细胞外脂酶(三酰基甘油酰基水解酶，E.C.3.1.1.3)。已在美国专利No.3,950,277中公开了适宜的脂酶。这些脂酶是从各种微生物如假单胞菌属、曲霉菌属、肺炎球菌属、葡萄球菌属、结核分枝杆菌、解脂芽生圆酵母、和核盘菌属中得到的。

在如EP463100(产碱假单胞菌)、EP0218272(类产碱假单胞菌)、EP0214761(洋葱假单胞菌)、EP0258068(Thermomyces)，EP206390(Pseccdomonas chromobacter、荧光假单胞杆菌、菌实假单胞菌、还原氮假单胞菌、划界假单胞菌和Chromobacter viscosum)中，给出了脂酶在洗涤剂组合物中用途的实例。

对于所需的应用领域，假单胞菌脂酶似乎具有良好的特征。因此，已经用假单胞菌属菌种来得到脂酶。为了在发酵中提高脂酶的产率，在同源和异源的宿主菌株中，已克隆并表达了几种脂酶基因。已经报道过的，从中克隆脂酶基因的假单胞杆菌属种的实例是洋葱假单胞菌(EP331376)、Pseudomonas glumae(EP464922)、类产碱假单胞菌(EP334462)、莓实假单胞菌(EP318775)。

假单胞杆菌属种的分类是以Palleroni等人(Int J.Syst.Bacteiol.23：333(1973))报道的，DNA-rRNA和DNA-DNA杂交研究为基础的。在Bergey′s Manual of Systematic Bacteriology(Vol.l，Seetion4，PP.160-161(1984)，Eds N.R.Kriegand J.G.Hoet，Williams and Wilkins，Baltimor/rondon)中，可见到更详细的综述。该综述同时报道的形态学数据和16s核糖体RNA同源性也支持该种分类法。

可以将具有良好应用特征的所述假单胞单菌菌株分成两个DNA同源组：类产碱假单胞菌、产碱假单胞菌、铜绿色假单胞杆菌(参见，如EP0334462)、施氏假单胞菌和门多萨假单胞菌非常相似，属于I类。例如铜绿色假单胞杆菌脂酶与类产碱假单胞菌脂酶有81％的同源性。Pseudomonas glumae和洋葱假单胞菌属于II类。表1列出了得自不同菌株的脂酶基因的同源性比较。从这种同源性比较中，可以看出，得自莓实假单胞菌的脂酶介于I类和II类之间。

来源于I类和II类的脂酶间有许多差异。发现属于I类假单胞菌的脂酶比属于II类的那些有更高的疏水性，因此是更亲脂的。这种特性对用于洗涤剂中是非常有益的。类产碱假单胞菌脂酶的疏水性使其容易粘附于表面。其它类或生物如Humicola Lanuginosa的脂酶常具有更高的亲水性。I类高疏水性脂酶仅需适当处理即可用于洗涤剂。

                                       表1