[发明专利]酰化蛋白凝聚物及其用来减少免疫测定中的干扰的用途

说明书

本发明涉及酰化蛋白凝聚物、其制备方法、及其用作免疫测定法减干扰剂和结合剂，以及用来减少免疫测定中的干扰的用途以及相应的免疫检测方法。

免疫检测方法近年来变得十分重要。它们用来以快速和准确的方式检测生物样品中药物、激素、蛋白、尤其传染性生物的存在。在所有免疫检测方法中，都是在第一特定结合配偶体，即待检测物质(被分析物或配体)，和专一地与该配体反应并与之结合的第二特定结合配偶体之间有一种特定结合反应。配体和与该配体结合的特定配偶体形成一个特定结合对，一般是抗原和抗体或抗体片断之间的配合物。在每个反应中可能有不止一种配体或一种结合配偶体彼此反应。这些特定结合反应是用不同方式检测的。一般来说，该特定结合反应的一种参与者是有标记的。普通标记方法使用放射性同位素、色原、荧光团或酶标记。在非均相免疫测定中，结合配偶体之一被固定在固相上。

免疫测定中的一个难题是，在免疫测定的特定结合配偶体和样品、样品中所含附加成分与(可能)固相之间可能有所不希望的相互作用和非特定结合反应。这些相互作用一般导致背景信号增强和这些信号的较高散射，进而降低该测试的灵敏度和专一性。与标记结合配偶体的非特定相互作用也可能导致假阳性结果，这意味着甚至当一种被分析物不存在时也错误地记录这样一种被分析物的存在。

为了减少免疫测定中的这些非特定相互作用，已经进行了各种尝试。一些时间以来已经知道，各种碳水化合物成分和各种蛋白质、蛋白质混合物或蛋白质部分以及它们的水解产物能减少免疫测定中测试成分与被分析物之间的非特定相互作用(例如，Robertson等人，Journal of Immun.Meth.26，1985，EP-A-260903，US-A-4，931，385)。使用蛋白质原部分和原水解产物的缺点是，其中所含的污染也可能导致该测试中的干扰。此外，用酶法产生的水解产物也可能受到用于其制造的蛋白酶污染。它们的质量也往往不均匀，因为裂解步骤是非常难以控制的。蛋白酶污染物会攻击测试成分，甚至少许数量也会对该测试的性能及其稳定性产生不利影响。

EP-A-0331068描述了使用聚合免疫球蛋白(IgG)来减少特定干扰因子，如类风湿因子。然而，非特定相互作用，尤其是标记结合配偶体和被分析物或固相之间的非特定相互作用，无法以一种令人满意的方式消除。此外，人体和动物IgG的产生是复杂和昂贵的。

为了减少免疫测定中的非特定相互作用，也已有人描述了化学改性蛋白、尤其琥珀酰化蛋白的使用(US-A-5,051,356,EP-A-525916)。然而，尤其在高分子被分析物如病毒抗原的测试中，先有技术尽管减干扰物质的浓度非常高，也不能确保令人满意地减少干扰。

因此，本发明的一个目的是提供新型减干扰物质和/或减干扰剂，它们与从先有技术已知的那些相比，改善了免疫测定中干扰的消除。本发明尤其旨在提供能产生低空白值、减少信号散射、尤其当分析高分子被分析物时避免假阳性结果的减干扰物质。

这个目的是借助于专门酰化的蛋白凝聚物实现的。

本发明的主题是作为免疫测定法减干扰物质、用-CO-R基团酰化的蛋白凝聚物，式中R是一个支化或非支化C₁-C₄烷基，可以有羧基、羟基、SO₃H或PO₃H₂基团取代。

本发明的另一个主题是一种相应的免疫测定用减干扰剂，包括一种含蛋白的减干扰物质和一种缓冲剂，其特征是它含有按照本发明的一种或若干种酰化蛋白凝聚物。

本发明的又一个主题是一种免疫测定用特定结合试剂，包括一个特定结合对中的一种配偶体，其特征是它还含有按照本发明的一种或若干种减干扰物质或减干扰剂。

本发明的又一个主题是一种通过让本发明的减干扰物质或减干扰剂与用于免疫测定的一个特定结合对的特定结合配偶体接触而减少免疫测定中非特定相互作用的方法。

本发明的一个具体主题是一种在减少非特定相互作用的同时测定样品中免疫配体的方法，它借助于

1)让该配体的待测样品接触

a)一种或若干种减干扰物质，或者一种或若干种含有减干扰物质和适当缓冲剂的减干扰剂，和

b)特定结合对的一种或若干种特定结合配偶体，其中至少一种结合配偶体是有标记的，形成一种可检测结合对；

2)测定标记结合对的存在或数量或一种特定结合对的自由标记结合配偶体，作为样品中配体存在或数量的量度，