[发明专利]含有编码杀虫蛋白质的基因的DNA片段

权利要求书

1.一种线性DNA片段，含有至少一个能在苏云金芽孢杆菌中复制并表达的编码杀虫剂的DNA序列，其中所述序列的5′和3′区均含有与苏云金芽孢杆菌染色体DNA序列同源的核苷酸序列，以便使所述编码杀虫剂的DNA序列能插入细菌染色体DNA中，或

一种环状DNA片段，含有至少一个能在苏云金芽孢杆菌中复制并表达的编码杀虫剂的DNA序列，其中所述序列的5′或3′区含有与苏云金芽孢杆菌染色体DNA序列同源的核苷酸序列，以便使所述编码杀虫剂的DNA序列能插入细菌染色体DNA中。

2.根据权利要求1的DNA片段，还包括来自革兰氏阴性细菌的复制原点和可选择标记。

3.含有权利要求1和2的DNA片段的杂种载体。

4.含有前述权利要求之DNA片段的苏云金芽孢杆菌宿主。

5.含有杀虫有效量的权利要求4的宿主和其载体的杀虫组合物。

6.制备转化的苏云金芽孢杆菌宿主的方法，该方法包括以下步骤：将权利要求3的载体或权利要求1或2的DNA片段导入苏云金芽孢杆菌菌株中，然后分离所得的转化体，其中所述编码杀虫剂的DNA序列被稳定地整合到宿主染色体DNA中并能在其中表达和复制。

7.根据权利要求6的方法，还包括转导被转化的宿主并制备受体苏云金芽孢杆菌，包括

a)将权利要求6的苏云金芽孢杆菌暴露于转导噬菌体；

b)使所述噬菌体在所述宿主中复制，其中在宿主染色体DNA中整合的一个或多个编码杀虫剂的DNA序列被掺入所述噬菌体中；以及c)将来自所述噬菌体的编码杀虫剂的DNA序列导入受体苏云金芽孢杆菌中，其中所述被导入的编码杀虫剂的DNA序列被稳定地掺入所述受体的染色体DNA中并被表达。

8.根据权利要求6和7的方法，其中苏云金芽孢杆菌宿主和受体选自苏云金芽孢杆菌kurstaki亚种的菌株。

9.根据权利要求6、7或8的方法，其中编码杀虫剂的DNA序列是cryIC序列或与其同源的序列。