[发明专利]L-氨基酸氧化酶

说明书

本发明涉及一种新的L—氨基酸氧化酶，其具有广范围的底物专一性，并可从Trichoderma harzianum获得。本发明的酶可用于各种情况的过氧化氢的原位(in situ)产生，并可以很好地与底物一起掺入洗涤剂组合物中，该组合物还含有过氧化物酶系，用于抑制洗涤过程中染料从一种染色织物传递到其它织物。

洗涤程序中漂白剂的应用以及其用作洗涤剂组合物的成份在本领域已众所周知。因此，漂白剂被掺入许多商品洗涤剂组合物中或被作为单独的制剂出售，洗涤时将其加入洗涤剂中。

混合入洗涤剂组合物的漂白剂大多常为过氧化氢的前体。过硼酸盐和过碳酸盐是最重要的用作漂白剂的化合物的例子。

向洗涤剂中加入漂白剂的最初目的是为了获得并保持衣料大体上洁白，更准确地说，是为了漂白上面的污迹，如茶、咖啡、果汁、红酒等。

后来要求含有过氧化氢或过氧化氢衍生的漂白体系能够减少染料的转移，即防止由于从染色织物上脱掉多余的染料而造成的褪色及染料在其它织物上的附着。但最近含有过氧化氢源和过氧化物酶的体系已公开，参见如国际专利申请WO 91/05839。该专利申请所报道的一个过氧化氢源的可能性是氧化酶体系，即氧化酶与其底物在一起的体系。当然，这种氧化酶必须能与洗涤基质共存，尤其是与过氧化物酶体系。

GB 2015532中报道了来自绿色木霉(trichoderma viride)、对L—赖氨酸具有高度底物专一性的L—氨基酸氧化酶。

现已发现，具有广范围的底物专一性的新的L—氨基酸氧化酶可由Trichoderma harzianum获得。该新型酶具有原位产生过氧化氢的优良性质。

因此，本发明提供一种L—氨基酸氧化酶(E.C.1.4.3.2)，其在15pH范围内的最适pH值为8.5至9.5(L—精氨酸存在时20°C下保温20分钟后测定)，pH9.5时相对于初始活力pH稳定性为80％或更高(在没有底物存在时40℃下保温1小时后测定)，并且对L—精氨酸、L—赖氨酸、L—蛋氨酸、L—天冬酰胺、L—苯丙氨酸及L—亮氨酸均具活性。

另一方面，本发明提供了一种制备本发明L—氨基酸氧化酶的方法，该方法包括，在含有碳源、氮源及无机盐的合适的培养基中培养L—氨基酸氧化酶的生产菌株Trichoderma harzianum，然后对所需要的酶进行回收。

再一方面，本发明提供一种含有本发明L—氨基酸氧化酶的洗涤剂添加剂，该添加剂以颗粒形式提供，优选无粉尘颗粒，以液体尤其是稳定化液体，浆或保护的酶的形式提供。

还有一方面，本发明提供一种含有本发明L—氨基酸氧化酶和该氧化酶底物的洗涤剂组合物。

根据用于专利程序目的的国际承认的微生物的保藏的布达佩斯条约，菌株Trichoderma harzianum，A611于1993年2月22日保藏于Centraal Bureau Voor Schimmelcultures(CBS)，Oosterstraat 1，3740 AG Baarn Netherlands，保藏号AccessionNo.CBS 223.93。

参考附图对本发明作进一步的说明，其中：

图1表明本发明L—氨基酸氧化酶的pH—活力曲线(％活力)；

图2表明本发明L—氨基酸氧化酶的pH稳定性(％残余活力)；

图3表明本发明L—氨基酸氧化酶的温度稳定性(％残余活力)；

图4A—4B表明与pHBS(促进剂)结合的过氧化物酶对本发明L—氨基酸氧化酶活力的影响(4A为无pHBS时情况；4B为50μM pHBS存在时情况)；

图5表明以灰盖鬼伞过氧化物酶(cip)和过氧化氢或L—氨基酸氧化酶(AAO)在pH 8.5、35℃时对甲基橙(8μM)染料的漂白过程(时间持续以秒计，465nm下；1：10nM Cip，230μM H₂O₂；2：10nM Cip，1mM L—亮氨酸，16μg/ml AAO；3：10nM Cip，53μM pHBS，1mM L—亮氨酸，16μg/mlAAO；4：10hM Cip，53μM pHBS，230μM H₂O₂)；    

图6表明以灰盖鬼伞过氧化物酶(Cip)和过氧化氢或L—氨基酸氧化酶(AAO)在pH 8.5 35℃时对甲基橙(8μM)染料的漂白过程(时间延续以秒计，465nm下；1：16μg/ml AAO；1mM L—亮氨酸；2：32μg/ml AAO，1mM L—亮氨酸；3：230μM H2O2)。