[发明专利]标记试剂和测定方法

说明书

在生物和化学分析中，常规使用的是用报道基团标记的分析物分子。根据本发明提出的想法可提供试剂，它具有至少两个与一个或多个报道基团相连接的分析物基团。可以下述方式使用这种试剂以便比简单标记的分析物产生多得多的分析信息。可以编码报道基团以使带有多种分析物基团和多种报道基团的试剂能被组合合成并同时使用，而且报道基团可在分析阶段被分辨出。

WO 93/06121(Affymax)描述了合成的寡聚体库，它含有多种不同的成员，每个成员所包含的寡聚体由一系列单体组成，单体与寡聚体中鉴定单体序列的一个或多个鉴定标记物相连接。寡聚体和鉴定标记物之间的连接优选包含固体颗粒，鉴定标记物优选为寡核苷酸。

Proc.Natl.Acad.Sci.，Vol 89，No，12，1992年6月15日，p5381-5383(S Brenner和R A Lerner)描述了用于制备各含有遗传寡核苷酸标记物的试剂的库的编码的联合化学过程。

在Rapid Communications in Mass Spectrometry，Vol 6，p369-372(1992)中，G R Parr等人描述了合成的寡脱氧核糖核苷酸之基质辅助的激光解吸/离子化质谱法。

在Nucleic Acids Research，Vol 21，No.15，1993年7月25日，p3347-3357中，E Nordhoff等人描述了核酸在红外基质辅助的激光解吸/离子化质谱法中的离子稳定性。

本发明一方面提供了一种试剂，它含有：

a)分析物部分，该部分含有至少两个分析物残基，并连接于

b)标记部分，此部分含有一个或多个适于通过质谱法检测的报道基团，不包括寡核苷酸，

其中报道基团标示出分析物残基，选择标记部分各个位置的报道基团用以标示在分析物部分的限定位置上的分析物残基。

优选分析物部分与标记部分通过可裂解(如可光裂解)的键相连接。也可以提供接头基团使分析物部分和标记部分都结合到接头基团上。优选分析物部分是n个分析物残基的链，标记部分是至多n个报道基团的链，选择标记链的各个位置的报道基团用以标示分析物链的相应位置的分析物残基。n是至少为2的整数，优选为3至20。

本发明可用于检测所有感兴趣的分析物，它们包括但不局限于蛋白质/肽链，从而分析物残基是氨基酸残基；核酸/寡核苷酸链，从而分析物残基是核苷酸残基；糖链，从而分析物残基是糖残基。另外，分析物也可以是具有生物学、药物学或治疗活性的一类小分子。例如，它可以是带有质谱标记的核心分子，该分子具有这样的能力，即可以组合的方式改变不同的取代基，如烷基、酯、胺、醚等。

标记部分和/或其中的报道基团或每个报道基团能被观察/检测/分析以便提供关于分析物部分和/或其中的分析物残基的特征的信息。

在一个实施方案中，试剂的化学式为A-L-R，其中A是构成分析物部分的n个分析物残基的链，L是接头，R是构成标记部分的至多n个报道基团的链，n是2-20，其中标记部分含有限定分析物部分的分析物残基之定位的信息。

标记部分由一个或多个质量有所区别的报道基团组成，因此可通过质谱法分析之。报道基团的化学特性也可能不相同，因此可通过分子量互相区别。或者报道基团可以化学特性相同，但是通过含有不同的同位素(例如下文讨论的¹²C/¹³C和¹H/²H)可互相区别。标记部分和/或报道基团适于在例如通过光化学或其它方法从试剂中裂解出来后通过质谱法分析。

质谱法作为检测系统的优点在于：其高度敏感性——仅需要几百个分子就可得到良好的信号；其广泛的动力学范围和高分辨率——可分辨出质量范围为100至200,000道尔顿的分子，分辨能力超过0.01；其通用性——可容易地分析出多种不同化学结构的分子；通过将质谱法和例如扫描激光解析结合反映分析物的潜力；相对于仅定性测定而言，还具有定量测定的能力。

因此质量标记结合了放射性和荧光的优点，并且还对新的应用有贡献。

在另一方面，本发明提供了上述试剂的库，其中此库由多种试剂构成，每种试剂含有不同的具有n个分析物残基的分析物部分。例如，此库可由4ⁿ种试剂构成，每种试剂含有不同的具有n个核苷酸残基的寡核苷酸链。此库中的试剂可混合存在于溶液中。