[发明专利]定量体液中的BPI的方法

说明书

本申请是申请日为1993年12月29日的美国申请系列号08/175,276的部分继续申请，而后者又是申请日为1993年9月22日的美国申请系列号08/125,677的部分继续申请。

本发明背景

本发明涉及测定体液样品(包括血液样品)中能杀菌并增加通透性的蛋白质之存在的方法。这种能杀菌并增加通透性的蛋白质(简称BPI)是一种阳离子型抗微生物蛋白质，它能从人类和动物的嗜中性白细胞的嗜苯胺蓝颗粒中纯化出来(Weiss等，J.Biol.Chem.，253：2664(1978)，Elsbachetal.，J.Bio1.Chem.，254：11000(1979).BPI能与革兰氏阴性细菌外膜上的脂多糖)简称LPS(成分结合)Gazzano-Santoro etal.，Infect.Immun，60：4754(1992)。最近，一种重组形式的人BPI(rBPI₂₃)已被览定出来并与天然BPI作了比较。rBPI₂₃片段由完整BPI的氨基端23KDa的部分组成，并保留了天然BPI与LPS结合的能力及抗微生物活性)Gazzano-Santoro etal，J.Clin.Invest.，90：1122(1992)，Weiss etal，J.Clin.Invest.，90：1122(1992))

在这以前，任何体液中的BPI水平还没有被精确地测定过。由于rBPI₂₃和其他BPI蛋白及其蛋白产物具有潜在的治疗用途，需要有一种灵敏且可重复的试验方法来测定体液BPI的存在和数量。特别是体液BPI的测量可能对诊断很有用处。Pereira etal，J.Immunol.Methods，117：15(1989)公开了一种竞争EIISA法可在人嗜中性白细胞的天然颗粒粗提物中测定BPI。Pereira等还公开了在EIISA法中阳离子蛋白的非特异性相互作用可用多阴离子如肚素或硫酸葡聚糖处理来减小。Pesce etal.，J.Immunol.Methoels，87：21(1986)也提到这点。但Pereira等的竞争试验的特征在于灵敏性有限，因而在本领域内仍希望有一种更灵敏的BPI试验可测量哺乳动物体液中的内源性BPI水平。本申请的另一感兴趣的是由Von der Mohien等在Abstract，13thInternational Symposium on Intensive Care and EmergenuyMedicine，Brussels(1993年3月)中公开的革兰氏阴性脓毒症患者和正常受试者BPI血清水平的试验结果。该摘要公开了在其试验条件下，健康受试者血清中检测不到BPI而在所有脓毒症患者中可以检测到循环的BPI

本发明概要

本发明根据对血液样品(在此指血浆)进行的BPI免疫试验提出了定量体液样品(包括血液样品)中BPI水平的方法。血浆是从新鲜、未凝集的血液中分离出白细胞和红细胞后保留下来的成分。血清是凝集的血经离心分离后保留的血液成分(即不含凝血因子的血浆)。本发明的一个方面认为血清BPI水平不能代表循环血液中BPI的内源性水平，而血浆BPI水平可代表。另一方面，本发明提供了用于检测受试者有无革兰氏阴性脓毒症的方法，包括检测该受试者血浆样品中内源性的胞外BPI浓度，并将此浓度与能指示革兰氏阴性脓毒症的标准浓度值相比较。这个标准值可以是1.7ng/ml，这比正常人血浆BPI的平均值0.8ng/ml高两个标准差。因而凡超出正常人血浆BPI浓度的平均值两个标准差以上的值就能指示革兰氏阴性脓毒症。

根据本发明，测定体液(如血浆)中胞外BPI的浓度较优选的方法是夹心免疫试验，并进一步使用一种选自由肝素和硫酸葡聚糖组成的一组物质中的阳离子非特异性封闭剂。本发明的BPI免疫试验也可用于测其他体液BPI浓度。这些体液包括血清、尿、肺灌洗液、玻璃体液、隙液、脑脊液、唾液和滑液，但也不限于此。