[发明专利]具有前B细胞生长支持能力的膜蛋白多肽及其基因

说明书

本发明涉及一种基因及由该基因编码的新的膜蛋白，更详细地是有关编码新的具有前B细胞生长支持能力的膜蛋白多肽的基因、含有该基因的载体及由该载体转化的转化子以及利用该基因制造新的膜蛋白多肽的方法。

本发明还涉及识别具有前B细胞生长支持能力的新的膜蛋白多肽的单克隆抗体。

本发明的基因可编码增强慢性风湿性关节炎(RA)患者的滑膜细胞表面的前B细胞生长支持能力的新的膜蛋白。将本发明的基因插入适当的截体，通过转化常用的宿主细胞，可以大量制造具有前B细胞生长支持能力的均一的新的膜蛋白多肽。因此利用本发明可以鉴别慢性风湿性关节炎，还可以制备用于临床诊断的试剂。

慢性风湿性关节炎病人的滑膜或滑膜液中的炎症细胞来自于末梢血液，对于这些细胞向滑膜的迁移还没有完全阐明，但认为它与给予细胞的化学信号和细胞膜上的蛋白(粘附分子)之间的复杂相互作用有关

关于膜蛋白在关节炎中的作用已经进行了各种研究。例如，已知在慢性风湿性关节炎病人(RA)的滑膜血管和滑膜内层上表达一细胞间的粘附分子-1(在下文称之为LCAM-1)，此粘附分子是T细胞表面分子LFA-1的配体并与血管壁中细胞的粘附和迁移有关。〔Hale et al.；Arthritis Rheum.，32：22(1989)，and Haynes et al.，Springer Sewn.Immunopathol.，11：163(1989)〕。

同样地有人提出在慢性风湿性关节炎(RA)和变形性关节炎的类成纤维滑液细胞和滑膜上表达有血管细胞粘附分子-1(在下文称为VCAM-1)，此粘附分子是T淋巴细胞(尤其是记忆细胞)和单核细胞上表达的integrin VLA-4的配体，〔Morales-Ducret et al.，J.Immunol.，149：1424(1992)〕，并且进一步在滑膜的内皮小静脉上表达有一被称为VAP-1的膜蛋白，该蛋白可能做为白细胞的专一性识别结构。〔Salmi et al.；Science，257，1407(1992)〕。

本发明者为调查骨髓微环境在引起B细胞机能异常的疾病中的作用，进行了广泛的研究，发现与正常人相比，来自于慢性风湿性关节炎(RA)和多发性骨髓瘤病人(MM)的骨髓基质细胞的前B细胞生长支持能力得以提高，并且前B细胞和基质细胞的直接接触对这种支持能力起一本质的作用。本发明者已建立了含有通过将病人的基质细胞，胞系来促进前B细胞生长的因子的基质细胞系(KASV5-5，MMSV3-3)，并发现这些基质细胞系的前B细胞生长支持活性可能是与不同于已知的干细胞因子(SCF)，ICAM，CD44，VCAM-1，LFA-1α，LFA-1β，NCAM和ELAM-1的其它未知粘附分子有关。〔J.Immunol.，149：4088(1992)〕。

而且，有人提出来自慢性风湿性关节炎(RA)病人的滑液细胞建立的滑液细胞系Syn SV6-14，与来自慢性风湿性关节炎病人骨髓的基质细胞系RASV5-5，具有相似的前B细胞生长支持能力，本发明者已获得了与这些细胞系反应，但与来自人骨髓的不具有前B细胞生长支持能力的基质细胞系NFSV1-1不反应的新型单克隆抗体，并同时成功地克隆了编码抗原膜蛋白(BST-1)的基因。(Japanese Patent Application NO.5-141178/1993)。

本发明者在制备各种可识别在慢性风湿性关节炎(RA)患者的滑膜细胞中表达的而在正常细胞中未表达的膜蛋白的单克隆抗体的过程中，得到了可识别具有与Syn SV6-14反应，不与正常骨髓间质细胞株NFS V_1-1反应的性质的、与上述的Bst-1不同的膜蛋白的新的鼠单克隆抗体RS38。然后，使用该RS38抗体筛选由慢性风湿性关节炎(RA)患者滑膜细胞株制备的cDNA文库，成功地分离得到编码和所述RS38反应的新的膜蛋白的克隆，从而完成了本发明。

即，本发明的目的是提供具有前B细胞生长支持能力的新型膜蛋白多肽、编码该多肽的基因、含有该基因的载体、由该载体转化的转化子及通过利用该基因产生新的膜蛋白的方法。

进一步，本发明的目的之一是提供识别具有前B细胞生长支持能力的新的膜蛋白的单克隆抗体。

为实现上述目的，本发明包括下面(1)-(7)。

(1)含有序列表的No.1序列所示的氨基酸序列或部分氨基酸序列的在风湿性关节炎病人的滑膜上表达的新的膜蛋白多肽。