[发明专利]重组p53腺病毒方法和组合物

权利要求书

1.携带腺病毒载体构建体的重组腺病毒，所说的载体包含编码p53的表达区，其能移在人恶性细胞中表达p53。

2.权利要求1的重组腺病毒，其中载体构建体包含位于巨细胞病毒IE启动子控制下的p53表达区。

3.权利要求2的重组腺病毒，其中载体构建体包含p53表达区、巨细胞病毒IE启动子及SV40早期聚腺苷酸化信号。

4.权利要求1的重组腺病毒，其中从载体构建体中删除了腺病毒复制所必需的基因并在其位置上导入了p53表达区。

5.权利要求1的重组腺病毒，其中腺病毒载体的E1A和E1B区被删除并在其位置上导入了p53表达区。

6.权利要求1的重组腺病毒，其具有图1所示的基因组结构。

7.权利要求1的重组腺病毒，其分散于药理学上可接受的配方中。

8.用依据权利要求1的重组腺病毒感染的重组宿主细胞。

9.恢复有野生型p53缺陷之细胞的野生型p53蛋白质功能的方法，其包括使细胞与一定量可在细胞中有效表达野生型p53的权利要求1的重组腺病毒接触。

10.权利要求9的方法，其中细胞是有p53基因突变的肿瘤细胞。

11.权利要求10的方法，其中细胞是人肺癌细胞。

12.权利要求10的方法，其中细胞是人乳腺癌细胞。

13.权利要求9的方法，其中细胞位于哺乳动物体内，并且腺病毒是以药理学上可接受的形式给哺乳动物投用的。

14.产生重组腺病毒的方法，该方法包括：

通过脂质体介导的转染将腺病毒质粒和表达载体导入适当的宿主细胞中；并

分析培养的宿主细胞是否有作为同源重组和病毒产生之指征的细胞病变效应。

15.权利要求14的方法，其中脂质体介导的转染步骤是DOTAP介导的转染。

16.权利要求14的方法，其中腺病毒质粒是有复制缺陷的腺病毒质粒并且宿主细胞弥补这一缺陷。

17.权利要求16的方法，其中腺病毒质粒缺少功能性E1A和E1B，并且宿主细胞是表达E1的细胞。

18.权利要求17的方法，其中宿主细胞是293细胞。

19.权利要求14的方法，其中宿主细胞是在MEM培养基中培养的。

20.权利要求14的方法，进一步包括从表现有细胞病变效应之细胞上清中得到DNA并使用表达载体特异性和腺病毒基因组特异性DNA探针经PCR分析DNA，以证实重组腺病毒的存在。

21.权利要求14的方法，其中表达载体包含p53编码DNA片段，该片段处于能够指导人转移性细胞中p53表达的启动子控制之下。