[发明专利]不溶于水的交联聚碳酸组合物

说明书

                 发明背景

                 发明领域

本发明涉及用沉淀法从水介质中除去蛋白质。

                 现有技术

传统方法是使用试剂或通过加热从水介质中除去蛋白质的。某些溶剂(氯仿，尿素)使蛋白质变性并使其沉淀。类似地，通过加入盐将介质中电解质的量提高到较高的程度也能沉淀蛋白质。此外，加热不仅使蛋白质变性而且还通常使蛋白质凝结，从而将其从水介质中分离出来。

这些去除蛋白质的方法主要有三个缺点。首先，从介质中除去的物质不是纯的蛋白质。而当介质中含有复杂的化学类混合物，如当介质是细胞溶胞产物时，用这些方法除了去除蛋白质外还会去除其他物质。第二，用这些方法去除的蛋白质一般都是不可逆变性或只在诸如渗析的耗时操作中才具有可变性。第三，无论是蛋白质的分离或是纯化，传统方法都包括使用有毒溶剂(苯酚和/或氯仿)。

U.S.P.4421653中描述的聚合物材料试图解决这些问题。该材料是与二胺交联的聚乙烯马来酸酐衍生物，但是，为了将一体积的血清脱蛋白需要多达9体积的溶液。这种“脱蛋白剂”的大幅度过量使用表明其效率低下、过于昂贵、不适于工业生产。此外，此基料在碱范围内(即pH10)沉淀蛋白质，使所要的蛋白质在温和碱条件下非常难以从基料中解析出来。

                        发明概述

本发明提供了一组不溶于水的交联多羟基聚羧酸组合物，它通过式(I)聚合物

其中R是氢或1-4个碳原子的低级亚烷基或低级烷氧基，或苯基，

q是7-10000的整数，

与式(II)的α，Ω二氨基羟基烷烃交联：

           H₂N.[(H)_p(CH)_z.(OH)_m].NH₂             (II)

其中z是1-4的整数，

p是0或最大为z-1的整数，

m是1或最大为z的整数，

并水解未反应的酸酐基团而获得，其中，二氨基羟基烷的初始量与聚(亚烷基马来酸酐)的初始量的比例介于约1∶1和约200∶1 mol/mol之间。

这些交联的多羟基聚羧酸组合物有至少两个链节，每个链节的链节构型如下式

其中每个链节中的至少一个链节内马来酰部分的一个羰基基团与式(IV)部分共价相连，

        -HN.[(H)_p(CH)_z.(OH)_m].NH-部分      (IV)

使其中存在有至少一个式(V)的链节内交联部分：

其中R是氢或1-4个碳原子的低级亚烷基或低级烷氧基，或苯基，

z是1-4的整数，

p是0或最大为z-1的整数，

m是1或最大为z的整数，

其中交联与聚(亚烷基碳酸)链节的比例介于约1∶2和约200∶2之间。

在式I聚合物与式II羟基二胺的反应产物中还存在有相应的、假定为式VI的“聚马来酯”：

其中y是最大为m的整数，其他的值如上所述。

本文公开的制备交联多羟基聚羧酸组合物的方法是，使式I的聚合物与式II的α、Ω二氨基羟基烷交联，并且用酸水解未反应的酸酐基团，得到式V和VI化合物的混合物。

用强碱作温和的处理，在室温下适当地稀释碱水几个小时，优选至少过夜，这样可以很容易地将该式(VI)的聚马来酯水解回原来的多元醇(V)。混合物的碱水解作用产生基本上纯的式V。

这两种交联多羟基聚羧酸组合物都提供了从含蛋白的水介质中沉淀蛋白质的方法，该方法包括向其中添加有效量的这种交联多羟基聚羧酸组合物，得到蛋白质/多羟基聚羧酸组合物基料。但是式V的化合物基本上比含有相应酯的混合物更有效。最好是，多羟基聚羧酸组合物的使用量(以重量计)至少等于含蛋白水介质中蛋白质的预计含量。此外，优选在水介质中使用多羟基聚羧酸组合物。已经发现在这个沉淀步骤中蛋白质和多羟基聚羧酸组合物在它们各自水介质中的重量浓度介于约3∶1至约1∶3之间时很有利，当蛋白质和交联多羟基聚羧酸组合物在它们各自水介质中的重量浓度基本相等时最合适。