[发明专利]从分枝层壁菌制备环胞多肽A的方法

说明书

本发明涉及从如下所述的分枝层壁菌(Tolypocladium sp.)中制备环胞多肽A的方法。

人们通常都知道，环胞多肽A作为器官移植手术中防止器官排斥的—种免疫抑制剂具有有益的用途。按照已知方法，环胞多肽可通过对变形分枝层壁菌(Tolypocladium varium)真菌菌株的培养而制备成复合物。英国第2227489号专利披露了生产环胞多肽复合物或其组分(即环胞多肽A、环胞多肽B和环胞多肽C)的一种微生物方法。该已知方法建议在一营养培养基上培养变形分枝层壁菌(Tolypocladium varium)真菌菌株来生产环胞多肽复合物。如同通常在发酵液体培养基中所用的那样，该营养培养基含有碳源、有机及无机氮源和无机盐。发酵象通常一样在有氧条件下进行，温度为25～30℃。如需要的话，将所生成的环胞多肽复合物加以分离，并提纯而生成纯化复合物。

该已知方法建议了一种优选的发酵培养基，它含有作为氮源的胨、硫酸铵和胰蛋白胨。优选的碳源为葡萄糖、麦芽糖和山梨糖醇。培养物变形分枝层壁菌Sp nov Cy/93存放号为NCAlM(P)F-001005。已知方法未提到仅生产环胞多肽A且其纯度不低于98％的方法。

本发明的目的在于提出一种制备环胞多肽A的改良性方法。

本发明的另一目的在于提出一种制备高产率环胞多肽A的方法。

本发明还有一个目的是提出一种制备具有基本均一纯度环胞多肽A的方法。

本发明使用了一新真菌分枝层壁菌(Tolypocladium)的某一菌种，其保藏号为NRRL 18950。与本发明中所用菌种相关的分枝层壁菌其它菌种的特性如表1所示。

                                             表1

                                 分枝层壁菌不同菌种特性之比较

特  性   T.inflatum    T.Cylindrosporum   T.geodus  Tolypocladium sp.生  长菌  落Hypac-大小分生孢子梗瓶梗担孢小梗     缓慢  白色、垫状  毛茸茸  大小：不明  1-1.5-2μm  短小、瓶梗具鳞状  基础，侧面及未端  有稠密的涡纹  不明  丝状        缓慢   白色及米色、垫状   毛茸茸，菌落背面无色   大小：15-20mm   1-1.5-3μm；   细胞2.5-2.7μm长   同T.inflatum   大小：3-5×2-2.8μm   细、丝状，有时弯曲   大小：1.5-2×0.3-0.5μm    缓  慢 白色、垫状 毛茸茸 大小：不明 1-1.5-2μm 同T.inflatum 不明 丝状      正  常  白色至米色、垫状  毛茸茸，菌落背面为米黄色  大小：20-30mm  2-6μm；细胞  6-30μm长  短小、圆筒状瓶梗具鳞状基础，  侧面及未端有涡纹  大小：4-3×2-4μm  细、丝状、有时弯曲  大小：2-4×0.6-1.2μm