[发明专利]金属硫蛋白的制取方法

说明书

本发明涉及一种金属硫蛋白的制取方法：

金属硫蛋白具有结合重金属离子，解毒，拮抗电离辐射，清除自由基和过氧化物的能力，它参与微量元素的储存、运输和代谢；参与激素和发育过程的调节，增强机体对各种应激的反应，而且它分子量小、稳定性好，是一种理想的保健品和化妆品的添加剂。目前，金属硫蛋白主要是从动物内脏如肝、肾、肠中提取，成本高、工艺复杂。本发明的目地是提供一种成本低、工艺简练的金属硫蛋白的制取方法。

本发明是这样实现的，一种金属硫蛋白的制取方法，它包括液体培养基的制备，还包括以下步骤：

A：向液体培养基中加入诱导金属硫蛋白产生的金属离子0.01-10毫摩尔；

B：将脉孢菌接种于液体培养基，在10℃-50℃温度条件下供氧培养5小时至7天；

C：将滤出的菌丝体反复冲洗后与含量为10％-100％温度为20℃-100℃的低级醇溶液混合，然后高速匀浆，超声破碎1-120分钟，然后高速离心，收集上清；

D：上清经超滤仪超滤，收集超滤清液；

E：将超滤清液真空浓缩1-50倍；

F：将真空浓缩液用蒸馏水或缓冲液稀释1-50倍，然后再次用超滤仪超滤，收集分子量小于50000的超滤液；

G：将分子量小于50000的超滤液经反渗透仪浓缩，然后将浓缩液干燥低温避光保存；

本方法为金属硫蛋白的生产提供了一条有效的途径，它利用生物发酵技术产生金属硫蛋白，而且提供工艺简练，适于工业化生产。本发明在步骤C中设计了用热低级醇溶液，并设计了超声破碎，这样提取的金属硫蛋白的数量多，纯度较高；在步骤F设计了第二次超滤技术，这样能进一步提高提取的金属硫蛋白的纯度。

以下是本发是的3个实施例：

实施例1.

A：向液体培养基中加入诱导金属硫蛋白产生的金属离子如Zn、Cd，0.01毫摩尔。

B：将脉孢菌接种于液体培养基，在30℃温度条件下供氧培养7天。

C：将滤出的菌丝体反复冲先后与含量为55％温度为20℃的低级醇溶液混合，然后高速匀速、超声破碎60分钟，然后高速离心，收集上清。

D：上清经超滤仪超滤，收集超滤清液。

E：将超滤清液真空浓缩50倍。

F：将真空浓缩液用蒸馏水或缓冲液稀释25倍；然后再次用超，滤仪超滤，收集分子量小于50000的超滤液。

G：将分子量小于50000的超滤液经反渗透仪浓缩，然后将浓缩液干燥，低温避光保存。

实施例2：该实施例的基本步骤同实施例1不同点如下：

步骤A中：金属离子5毫摩尔；

步骤B中：在50℃温度条件下供氧培养5小时；

步骤C中：与含量为100％温度为100℃的低给醇溶液混合，然后高速匀浆、超声破碎120分钟；

步骤E中：浓缩1倍；

步骤F中：稀释1倍。

实施例3：该实施例的基本步骤同实施例1不同点如下：

步骤A中：金属离子10毫摩尔；

步骤B中：在10℃温度条件下供氧培养3.5天；

步骤C中：与含量为100％温度为60℃的低级醇溶液混合，然后高速匀浆、超声破碎1分钟；

步骤E中：浓缩25倍；

步骤F中：稀释50倍。