[发明专利]转录因子APRF

说明书

本发明涉及新的转录因子，急性期反应因子(下文缩写为APRF)，编码它的DNA，寻找抗APRF功能的抑制剂的测定和筛选方法以及抗所述APRF功能的抑制剂。

更具体地说，本发明涉及与细胞中白细胞介素6(下文缩写为IL-6)的信号传递有关的转录因子APRF，及其制备方法，编码它的DNA，含所述DNA的复制和表达载体，用所述复制和表达载体转化或转染的宿主细胞，寻找抗APRF功能的抑制剂的测定和筛选方法以及抗所述APRF功能的抑制剂。

生物信号传递物通过将生物活性物质刺激的信号传递到细胞中，从而介导细胞应答。狭义上讲，生物信号传递物是指一种物质，它从生物活性物质的受体收到信号并调节细胞核内的基因表达。在所述的生物信号传递物质中，与核DNA结合并调节基因表达的蛋白质被称为转录因子。在本发明中，称这些因子为转录因子。

通常转录因子本身是蛋白质。转录因子具有从一级生物活性媒介物到细胞，将信息(信号)传递给核内DNA的功能，并具有在转录阶段，调节二级蛋白质表达的功能。即当第一生物活性物质作用于细胞并表达第二蛋白质时，转录因子在细胞内起作用。通过所述转录因子的转录包括提高(加速)表达和降低(限制)表达。在本发明中，通过第一蛋白质的作用调节其表达的第二蛋白质被称为可诱导蛋白质，该蛋白质的相应基因被称为可诱导基因。例如，由IL-6诱导的蛋白质，如结合珠蛋白被称为IL-6诱导蛋白，而所述蛋白质的基因如结合珠蛋白基因被称为IL-6诱导的基因。

由IL-6促进其表达的蛋白质实例有上述的结合珠蛋白，hemopequisin,C-反应蛋白，α2-巨球蛋白，α1-酸性糖蛋白，以及已知的在炎症的急性期明显出现的那些蛋白质。相反，血清白蛋白是由IL-6抑制其表达的一种蛋白质实例。

转录物质与可诱导基因DNA的特定序列结合，然后调节所述可诱导基因的表达。通常，由转录因子结合的DNA序列位于启动子区附近。可诱导基因的上游。由转录因子结合的DNA序列与转录因子的种类有内在一致性。在文献1(Montminy,M,Science 261,1694(1993))中描述了近期的转录因子研究。

迄今，已知NF-IL-6是与IL-6的细胞内信号传递有关的转录因子(参见文献2:Akira,S等人,EMBO,J.9,1897(1990)，文献3:Poli,V.等人,Cell,63,643(1990)，文献4：kinoshita,S.等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA.89,1473(1992)等)。

然而，在上述文献中，还没有关于转录物质直接从IL-6受体将转录信号传递给IL-6诱导基因的描述。另一方面，已知序列：CTGGGA位于该IL-6可诱导基因的上游。因此，在文献5(Wegenka,U.M.等人,Mo1.Cell Biol.,13,276,1993)中提供了某些由IL-6激活并结合所述序列的物质，但在该文献中，尽管提出了所述蛋白质因子的存在，但未弄清所述因子的序列、结构、物理或化学特性如分子量。在该文献中，未公开转录因子APRF这种物质本身。

转录物质存在于细胞内，并且当生物活性物质(第一蛋白质)与上文描述的细胞受体结合后，通常它通过被磷酸化，移到核内并与适当DNA序列结合，而调节可诱导基因的转录。因此，可以影响所述转录物质的作用如抑制的物质，可被作为与上述生物活性物质有关的疾病的治疗药剂。

从上述角度看，本发明人的目的在于与炎症等疾病有关的IL-6。本发明人分离并纯化了APRF并确定了部分氨基酸序列，克隆了所述基因，确定了作为转录因子的APRF的全部核苷酸序列和推测的全部氨基酸序列，并首次得到作为物质的APRF本身。

本发明人继续研究并建立了利用APRF确定和寻找可用于治疗由IL-6诱导的疾病(如炎症疾病，白血病，癌，由活化的破骨细胞诱发的骨破折，肺动脉高压等)的物质的方法。而且本发明人还得到了所述抑制剂。本发明是以这些知识为基础完成的。

本发明提供实质上纯化的哺乳动物转录因子APRF。

实质上纯化的形式指，例如对于SEQ ID NO1或5所述多肽的情况下，在制品中的多肽，其中制品中90％以上，如95％,98％,或99％的多肽是SEQ ID NO.1或5的多肽。