[发明专利]促卵泡激素的用途

说明书

本申请是申请号为88103966.7的专利申请的分案申请。

本发明涉及促卵泡激素，含有它的药物组成物和它的纯化方法。

促卵泡激素已知对于不育症的治疗是有用的。含有这种激素的制剂已被在体内和体外的技术中采用以帮助受孕。人体FSH已经从人腺垂体和绝经后的人尿中分离出来了。最近，它已通过采用DNA重组技术而制备。

含有人体FSH的第一代商用产品含有HMG(即，Pergonal^serono)，即从人体绝经后的尿中提取出来的人体绝经促性腺激素，它它是FSH、促黄体激素(LH)和其它的尿蛋白的混合物。同时，有几种设想被用于得到科研和治疗用的纯FSH制剂。最近投入商用的Metrodin(Serono)产品是一种含有极少量LH，但含有其它尿蛋白的尿促卵泡激素(尿FSH)制剂，它被用于不育症的治疗。当不希望将FSH和外源LH一起用药，如用于多囊卵巢综合症(POOS)时，使用该产品是尤其好的。

至今，不通过肌内注射使用FSH进行治疗已经成功地进行了。因为肌内注射通常要由医生或医护人员来进行，病人要定期地去诊所或医院以便接受治疗。这就造成了大大的不方便。进一步地说，因为治疗通常要延长到几星期以至几个月，这样的治疗方法所花费的时间常常使得病人不乐意依从。

通过皮下注射而给药提供了由病人自己给药的可能性，因而改善了病人的合作性和依从性。

人体绝经促性腺激素(HMG)的皮下给药已经被描述过(Nakamura Y·等，《生育和绝育》46(1):46～54,1986)，它是关于经过皮下蠕动泵，依靠脉动给HMG药而治疗女性不育症。因为在所用产品中有杂质存在，皮下注射具有要产生局部过敏反应的缺憾。因此，治疗须用悬浊液。

P·Roos(“人体促生育激素”《Acta EndocrinologicaSupplementum 131,1968)描述并说明了分别从冰冻垂体和绝经后的尿浓缩液中所得到的高纯度的垂体和尿的FSH制剂的特征。所得的每毫克垂体FSH中FSH活性的生物效价高达14,000国际单位(I·U·)，每毫克尿FSH中FSH活性的生物效价为780I·U·。在大多数活性垂体和尿制剂中LH污染量估计约为0.1％(重量)。纯化过程则包括如下一种或多种技术：在二乙氨基乙基纤维素上层析，在交联葡聚糖G-100上凝胶过滤、羟基磷灰石层析、聚丙酰胺凝胶电泳等等。

纯化的最好的FSH制剂的一种被Donini等描述过[“从绝经后的尿中得到的FSH的纯化和部分化学物理特性”《Gonadotrophins and Ovarian Development》(二个学术会议的会议录)，Livingstone,Edinburgh和London；1970)，且每毫克FSH生物效价为1255.6I·U·，而每毫克LH中LH污染降低为3.2I·U·。这种情况下，起始物质是人体绝经促性腺激素(HMG)制剂(注册商标为Pergonal)，它就如上面所陈述的，是一种FSH和LH激素以及其它尿蛋白的混合物。结果产物是通过将起始HMG放在二乙氨基乙基纤维素上纯化，接着在二乙氨乙基纤维素层析柱中层析，在交联葡聚糖G-100上凝胶过滤，最后，进行制备型聚丙酰胺凝胶电泳这样分批纯化而得到的。

H·Van Hell等通过在惯用的层析纯化步骤中增加免疫层析和凝胶过滤步骤而得到了很高的生物效价[“人体尿FSH和LH的纯化和一些特性”《Gonadotropins》(关于促性腺激素的国际性专题讨论会1记录，1971),Wiley Intersci ence，纽约]。为了达到从部分纯化的FSH片断中排除LH活性的目的，免疫层析系采用抗HCG抗体偶联到琼脂糖上而进行。最好的纯化FSH片断中，通过放射免疫测定法(RIA)分析得每毫克FSH中含有4720I·U·FSH，而每毫克LH中LH污染低至15I·U·。

免疫层析的探讨业经由Donini等描述过(“从HMG中纯化和分离FSH和LH”《Acta Endoc rinologica》52,186～198页，1966)，早在1966年，他们就得到了每毫克FSH的效价为329.7I·U·和生物学测不到的数量的LH污染的FSH制剂。在另一个实验中，得到一片断，分析得其每毫克FSH效价为148.3I·U·，每毫克LH效价为2.4I·U·。因为在每毫克FSH效价为329.7I·U·的制剂中没有进行放射免疫测定，可以通过与H·VanHell(c.f.supra)的结果相似来假定，如果采用放射免疫测定，将发现痕量的LH。