[发明专利]新城疫病毒的用途和制备方法

说明书

本发明涉及新城疫病毒用于防治人类疾病的技术领域。

新城疫病毒是副粘液病毒属的代表种，是禽类的一种高度感染的致死性疾病。可侵袭呼吸道胃肠道以及中枢神经系统。在感染禽类的血液、脑、内脏、粪便和口鼻分泌物中可发现本病毒。目前各国都采用预防接种作为控制新城疫毒的主要措施。预防接种的疫苗有弱毒活疫苗和无活疫苗，弱毒活疫苗有弱毒疫苗和中等毒疫苗两类。

本发明的目的是，将新城疫病毒疫苗用于防治人类疾病，使其产生较好的治疗效果，并对人类无害。

本发明采用禽类用的新城疫病毒疫苗，防止人类疾病，采用弱毒活疫苗防治呼吸道病毒感染、病毒性角膜炎、慢性活动性肝炎、巨细胞病毒感染、乙型脑炎、肺炎、腹泻、流行性出血热、成骨肉瘤、肺腺癌、鼻咽癌、肝癌、食道癌、白血病、爱滋病、免疫调节性疾病。

本发明采用的弱毒活疫苗是弱毒株、F株(III系苗)，B1株(II系苗)、Sota株(IV系苗)、中等毒疫苗毒株为I系苗，Rakiu株，Komorov株，Rlertfordshire株(Herts33)和Mukteswer株。

本发明经研究试验得：新城疫病毒是干扰素诱异剂、进入机体后，可诱导机体产生干扰素，干扰素作为一种细胞因子具有广泛的生物学功能，如抗病毒、抗肿瘤、免疫调节、调控细胞增殖和分化。当新城疫病毒进入机体就可诱导机体产生干扰素。即内源性干扰素(白动免疫性)。这种自身产生的干扰素比特异性抗体产生要早，持久，有阻止疾病发生的作用。干扰素的主要作用就是对巨噬细胞和自然杀伤细胞的功能有促进作用，可调动机体免疫系统杀伤肿瘤细胞，所以是一种增强免疫、抗肿瘤、抗病毒的较理想制剂。

本发明用于防治人类疾病的新城疫病毒疫苗的制备方法可简述为：先取鸡胚，然后进行鸡胚接种之后，收获尿液，再做血凝试验和效力试验，血凝效价要求为10^-11，当收集尿液血凝效价达不到10^-11者，需要继续传代，使血凝效价提高，或通过超速离心浓缩后，使其效价提高，提取疫苗后，做毒株抗原性试验，免疫原性试验、浓缩、纯化病毒后，抽样进行无菌试验达到通常试验要求后保存。

本发明用于防治人类疾病的新城疫病毒疫苗的制备方法可详述为：

一、鸡胚：购买SPF受精鸡蛋38℃-39℃孵育9-10天，SPF：无特定病原鸡(无细菌、霉菌、支原体及外源病毒)。

二、鸡胚接种：

1、取孵育9-10天鸡胚，在检卵灯上划出气室境界并在绒毛尿囊膜发育良好区和气室端的蛋壳上标记，用碘酒精消毒，锯一注射用小孔。(勿伤及卵膜)。

2、将鸡蛋固定于蛋架上，用无菌注射器抽取毒株尿液，由注射小孔刺入0.5-1cm，注射0.1-0.2ml。

3、注射毕用胶布沾95％酒精火烧消毒或石腊封注射孔。

4、鸡卵放入36℃温箱中孵育，每日检视1-2次，孵育48小时内将死鸡胚丢弃。

三、收获尿液：严格无菌操作

1、接种孵育48-120小时存活的鸡胚，置2-8℃冷却4-24小时，将气室端用碘酒精消毒。    

2、击破气室之卵壳，沿气室周围剪除卵壳，撕去壳膜与绒毛尿囊膜，用吸管吸出尿液置无菌瓶中。

四、血凝试验：

取收集尿液0、1ml做血凝试验，血凝效价≥1∶160为感染。

五、效力试验：计算半数感染量ID₅₀

无菌生理盐水10倍稀释尿液分三个浓度尿囊腔接种10日令鸡胚各5只，各只鸡胚接种新收集之尿液0、1ml36℃孵育48-120小时，取出尿液做血凝试验，血凝效价≥1∶160为感染。

本发明治疗用血凝效价要求10^-11，凡收集尿液血凝效价达不到10^-11者需要继续传代，使血凝效价提高，或通过超速离心浓缩后，使其效价提高，提取疫苗完毕，然后再进行以下操作。

六、毒株之抗原性：免疫大白鼠后采血取血清做血凝抑制试验。

七、免疫原性：接种小白鼠后采血进行细胞免疫试验。

八、浓缩、纯化病毒

将收集之尿液效价在10^-11者，经差速离心即低速、中速、超速、最后取沉淀物(病毒)加入适量无菌生理盐水，计算浓缩倍数。

九、保存：-30℃以下保存或按需要生理盐水稀释分装后-30℃保存备用，或稀释液用1640(内有酚红指示剂)稀释分装。