[发明专利]人类免疫缺陷病毒丙肝病毒抗体联合诊断试剂的制备方法

说明书

本发明涉及一种人类免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒抗体联合诊断试剂的制备方法。

目前，输血或使用血液制品是爱滋病及丙型病毒性肝炎感染的主要途径，因此事先对献血员进行是否感染爱滋病病毒-1/2或丙型肝炎病毒的检测是至关重要的。对于此项工作至今为止国内外的检测方式都是采用分别对其HIV-1/2抗体及HCV抗体进行单项检测的形式，此种形式的检测方式不仅操作起来比较烦琐，而且根本无法通过一次检测同时确定献血员是否感染过上述两种病毒。由此，长期以来给医护人员、患者及献血员带来诸多不便。

本发明的目的是提供一种能够克服上述技术不足部分的人类免疫缺陷病毒、丙肝病毒抗体联合诊断试剂的制备方法。

本发明的目的是这样实现的：取人类免疫缺陷病毒-1/2抗原和丙型肝炎病毒抗原，用PH=9.5的碳酸盐缓冲液适当稀释制成包被液，由此包被液包被于载体之上制成，将包被后的载体置于温度在2-8℃的环境下存放10-18小时，或者置于温度在37℃的环境下存放1-3小时，然后用洗涤液充分洗涤其载体，再将其置于温度在37℃的环境下干燥4小时，即成为预包被载体，该预包被载体附加袋装干燥剂用塑料袋密封后，在温度在2-8℃的环境下存放即可。使用时，将上述预包被载体配以酶标结合物，HIV-1/2阳性血清，HCV阳性血清、HIV-1/2和HCV阴性血清、样品稀释液、洗涤液、底物溶液及终止液等相应试剂，即可通过一次取样同时对献血员或查体者、可疑人群进行人类免疫缺陷病毒及丙型肝炎病毒抗体的检测。

本发明的特点：将HIV-1/2和HCV两种抗原包被于同一载体上，与其它相应试剂配合组成联合诊断试剂，可对献血员或查体者、可疑人群通过一次取样即可同时检测出是否感染过HIV-1/2和HCV，本发明并具有操作方法简便、快速、灵敏、可靠及经济等显著的优点，是一项值得推广的技术。

实施例1

以聚苯乙烯微孔反应板为载体，进行预包被：

分别取HIV-1/2抗原、HCV抗原，用PH=9.5碳酸盐缓冲液适当稀释制成包被液，在微孔反应板上，每孔加入包被液100μl，置4℃10-18小时，或37℃1-3小时后，弃去包被液，用洗涤液洗3次，置37℃4小时后，加1包干燥剂，装于塑料袋中密封，置2-8℃贮存。

包被好的微孔反应板，再配以相应的试剂：酶标结合物、阳性对照、阴性对照、样品稀释液、洗涤液、底物溶液(A、B)、终止液，即可用于对待测样品的检测。

实施例2

以硝酸纤维膜为载体进行预包被：

分别取HIV-1/2抗原和HCV抗原，用PH=9.5碳酸盐缓冲液适当稀释制成包被液。取硝酸纤维膜切成适当大小，划成所需的小格，用微量加样器吸取包被液，每格中间加适量，待干后，加干燥剂1包一起密封于塑料袋中，2-8℃贮存。

上述包被好的硝酸纤维膜，配以相应的试剂：酶标结合物、阳性对照、阴性对照、样品稀释液、洗涤液、底物溶液(A、B)、终止液，即可用于对待测样品的检测。

实施例3

HIV-1/2、HCV抗体联合诊断试剂制备完毕，即可用中国生物制品检定所提供的参比血清作参比进行检定，应符合以下标准：

(1)特异性：对15份阴性参比血清检测结果不得出现假阳性；对15份HIV-1/2抗体阳性和15份HCV抗体阳性的参比血清检测不得出现假阴性。

(2)灵敏度：用10份HIV-1/2抗体(含强、中、弱)阳性血清样品检测，不得出现假阴性；HCV抗体检测应符合系列参比的检出终点。

(3)精密性：用精密性参比血清测定(n=10)，其OD值的CV(％)应＜15％。

(4)稳定性：37℃放置3天，检定指标应达到以上标准。

(5)保存与效期：保存于2-8℃，自检定合格之日起效期为6个月。

实施例4

检测时，用制备好的预包被载体，与酶标结合物HIV-1/2阳性血清、HCV阳性血清、HIV-1/2和HCV阴性血清、样品稀释液、洗涤液、底物溶液(A、B)及终止液等相应试剂配合使用。具体操作时，取一预包被载体如预包被微孔反应板，将待测样品用样品稀释液21倍稀释后，注入预包被载体上的孔内，其每孔注加100μl，同时加空白对照1孔、2种阳性对照各2孔、阴性对照3孔各100μl，置37℃1小时后弃去上述反应物，用洗涤液冲洗4次，再加酶标结合物每孔100μl，置37℃1小时后洗涤4次，加底物溶液100μl，置37℃30分钟，加终止液50μl，用酶标仪于450μm测每孔OD值。以样品孔OD值＞2.1×阴性对照平均OD值为本试验阳性，即说明该所测样品感染过HIV-1/2或HCV。此后对阳性样品应再用HIV-1/2和HCV单测试剂分别进行检测，以区分为何种病毒感染。