[发明专利]一种抗体／蛋白Ａ－ＤＮＡ探针的构建方法

权利要求书

1.一种抗体/蛋白A-DNA探针的构建方法，抗体指一抗和二抗，其特征在于，该方法包括三个必需的步骤：将抗体或蛋白A与对苯醌(PBQ)反应，加入聚乙烯亚胺(PEI)，加入交联剂戊二醛，该方法的全部步骤罗列如下：

第1步  取0.01～10mg的抗体或蛋白A，溶于440μl的，浓度和pH值分别为90m mol/l和6.0的磷酸缓冲液中，以抗体为原料，最终构建成的探针是抗体-DNA探针，以蛋白A为原料，最终构建成的探针是通用型蛋白A-DNA探针；

第2步  向第1步制备的溶液中加入120μl的PBQ溶液，再把混和溶液置于温度为37℃的黑暗环境，反应时间为1小时；

第3步  将第2步的反应液上Sephadex G 100柱，并用浓度为0.1～0.2mol/l的NaCl溶液洗柱；

第4步  收集第3步形成的洗涤液4ml；

第5步  向第4步收集的溶液中加入360μl的，浓度为1mol/l的NaHCO₃的溶液；

第6步  向第5步制备的溶液中加入266μg的PEI后，置于温度为37℃的黑暗环境，反应时间为2小时；

第7步  将第6步的反应液装入透析袋中，对浓度和pH值分别为5m mol/l和6.8的磷酸缓冲液透析，透析时间为12小时；

第8步  收集第7步的经透析的反应液，保藏在温度为4℃的环境，备用；

第9步  取经提取纯化的质粒PNC DNA 1μg，溶于20μl的，浓度和pH值分别为5m mol/l和6.8的磷酸缓冲液中；

第10步  将第9步制备的溶液置于温度为100℃的沸水中，时间为3分钟，再把溶液置于冰中，时间为3分钟，重复上述操作三次；

第11步  向第10步形成的溶液中加入20μl的第8步的冷藏溶液；

第12步  向第11步的混和溶液中加入6μl的，浓度为5％的戊二醛溶液，再在温度为37℃的环境下孵育10分钟；

第13步  将第12步的反应液代替第2步的反应液，重复第3、4步，即得抗体-DNA探针或蛋白A-DNA探针。