[发明专利]一种毛细管电泳柱的制备方法

说明书

本发明涉及色谱分析技术，特别提供了一种毛细管壁的改性方法。

文献(1)John K.Towns and Fred E.Regnier Anal.Chem.1991，63，1126-1132，提供了一种采用C18烷基硅烷的二氯甲烷溶液，化学键合方式，使毛细管内壁涂渍一层亲水基团，然后再用非离子型表面活性剂吐温-20沉积在上面，完成毛细管壁改性的方法。其PH应用范围窄，工艺复杂，重复性差。文献(2)Northeastern University，Boston，Mass.U.S.Pat.5,089,106，提供了一种采用C18烷基硅烷作键合相，表面活性剂十二烷基麦芽塘苷(dodecylmaltoside)进行物理吸附，然后再用丙烯酰胺为单体聚合，使毛细管管壁表面的Si-OH基团被充分屏蔽，完成毛细管管壁改性的方法。该方法存在涂渍效果差，使用寿命短的缺憾。

本发明的目的在于提供一种工艺简单的毛细管壁的改性方法，改性后的毛细管重复性好，PH值适用范围宽且使用寿命长。

本发明提供了一种毛细管壁的改性方法，采用C18烷基硅烷键合相作键合担体，采用非离子型表面活性剂吐温进行物理沉积，其特征在于：C18烷基硅烷键合相系采用有机胶物理粘着的方法粘附于毛细管壁上的，所用有机胶为甲基丙烯酸二乙基胺乙酸盐，使用重量百分浓度为0.5％-2％。C18烷基硅烷键合相的使用浓度为0.1％-1％，非离子表面活性剂的使用浓度为重量百分浓度0.01％-2％。

本发明首次采用有机胶将C18烷基硅胶键合相担体粘着在毛细管壁上的物理方法，再用表面活性剂吐温沉积，使毛细管壁具有极低的电渗流，并有很强的抗碱性，能有效地解决蛋白质分离时管壁的吸附问题。与现有技术文献(1)中的化学吸附相比，工艺简单，重复性好，PH应用范围广，和文献(2)相比我们采用吐温的物理沉积方法，省去了聚丙酰胺涂渍的步骤，简化工艺，涂渍效果好，柱子使用寿命长。

下面通过实施例详述本发明。附图1.五种标准蛋白质样品的毛细管电泳谱图

条件：涂渍柱：40cm 50μcm

      电压：8.0KV，(-)→(+)

      进样：8.0KV

      缓冲液：0.1M tris-硼酸溶液PH10.0

      检测：UV200NM，0.01AUFS

(a)   EPO毛细管电泳图进样时间60S

(b)   hGH毛细管电泳图进样时间40S

(c)   α-IFN毛细管电泳图进样时间50S

(d)   β-IFN毛细管电泳图进样时间12S

(e)   γ-IFN毛细管电泳图进样时间30S附图2.一组蛋白质样品的分离谱图.

条件：柱：      26cm，50μm

      进样：    8.0KV.4S

      操作电压：8.0KV

      缓冲液：  0.1M磷酸盐PH2.5

      检测：    UV220nm 0.01AUFS

(a)胎脑垂体培养液毛细管电泳图

(b)分子量1万以下毛细管电泳图

(c)分子量1-3万组分毛细管电泳图

(d)分子量1→3万毛细管电泳图

附图3.衍生后的氨基酸化合物CZE谱图

1.Asp 2.Glu 3.Gly 4.Ala 5.Ser 6.Pro 7.Val

8.Leu 9.Met 10.Phe 11.Try 12.Lys 13.His

条件：柱：      20cm，25μm

      运行电压：7.0KV(-)→(+)

      进样电压：7.0KV 5S

      缓冲液：  Ph：8.0的磷酸盐

      检测：    UV254nm 0.05AUFS实施例：

毛细管柱的制备

1.根据需要截取一定长度的石英或玻璃毛细管(内径25-100um)，用1M的氢氧化钠(NaOH)溶液冲洗30分钟后，用水洗去柱中多余的碱，然后再用1M的盐酸(HCl)冲洗毛细管柱30分钟，用水洗至中性。

2.将重量百分浓度0.5％的有机胶甲基丙烯酸二乙基胺乙酸盐水溶液压入毛细管内，吹干后通入重量百分浓度0.5％的C18烷基硅胶担体的丙酮溶液，将柱子放在200℃温度下老化2小时后，再将0.5％的吐温-80的水溶液通入毛细管内，吹干待用。