[发明专利]鲎试剂细菌内毒素快检盒及使用方法

说明书

本发明属一种鲎试剂细菌内毒素快检盒及使用方法。

目前，利用鲎试剂(鲎血细胞溶解物)检测微量细菌内毒素的鲎试验法，在我国引起越来越多的医药卫生工作者的重视，不少单位已经成功地制备了鲎试剂，并且用于样品检测。然而使用家兔法，要饲养家兔，很麻烦，若用试管法，对于强阳性反应(形成固态凝胶)和阴性反应(无变化)容易判断，但对于区分弱阳性和阴性反应，在判断上就有一定的困难，同时要消耗较多的鲎试剂，其他方法如载玻法、凹片法、干板显微检验热原法等，提高了鲎试剂的准确性和灵敏度，也节省了大量鲎试剂，但检测时间较长，对临床诊断有所影响。鲎试剂细菌内毒素检验法应用的鲎试剂一般是鲎试剂厂家按10支/盒(包括0.1ml/支、0.5ml/支)装发放给用户的，使用者购买到鲎试剂后，还必须花1-2天的时间处理检测用具后，才能开展实验，这不仅使用麻烦，又增加了工作量及实验成本等。

本发明的目的是提供一种鲎试剂细菌内毒素快检盒及使用方法，先按各种实验的要求，将鲎试剂、内毒素、溶解液、移液滴管包装成试剂盒，简化实验操作，一盒在手，只需点燃一只酒精灯即可开展检测工作，大大提高了工作效率和降低了检验成本的消耗等。

本发明由鲎试剂细菌内毒素快检盒及使用方法组成。细菌内毒素快检盒是按细菌内毒素检查法所需的有关用具经过特殊处理后，分套包装成试剂盒，如图1所示长方形底盒内左边空格并列0.5ml鲎试剂6瓶、5EU/ml内毒素3瓶、5ml溶解液2瓶，右上边空格内并列移液滴管7支，右下边空格内装5ml溶解液1支。然后盖上盒盖便可。

细菌内毒素快检盒的使用方法：

1、材料准备

①明确被检品批号的数量，选择适当的快检盒。

②酒精灯一盏。

③恒温水浴箱一台。

2、实验操作

①在实验前，先接通水浴箱电源，调节温度旋钮，使温度升为37℃±1，恒温。

②将快检盒打开并取出鲎试剂、溶解液、内毒素、反应试管(或空安瓶)，移液滴管等，用酒精棉球消毒外壁及瓶颈备用。

③点燃酒精灯。

④将反应试管插入试管架或将空安瓶用小砂轮割锯曲颈上端一周，并用酒精棉球消毒后，每四支用胶布捆成一组，每组做二个批号检品，其中一组做一支阴性和一支阳性的对照管记号。

⑤把配给的0.6ml/支(或1ml/支)移液滴管的玻璃部分置酒精灯火焰上烤2-3分钟灭菌，插入配给的一支空瓶中，等冷却使用。

⑥将被检品的密封盖去掉，翻起胶塞，用酒精棉球消毒瓶口周围和胶塞，并在酒精灯上烧1-2分钟，备用。

⑦开启溶解液，复溶鲎试剂和内毒素备用。

⑧根据检品内毒素限量值多少和鲎试剂灵敏度，将被检品稀释成相应的有效倍数并混均匀备用。

⑨将复溶均匀的鲎试剂分别滴加在每支反应管里，再分别将各个检品滴加在相对应的批号反应管与鲎试剂混合，并盖上胶布封口，轻轻摇均匀，放入水浴箱保温60±1分钟后看结果

⑩结果判断

将实验反应管从水浴箱中缓慢取出，并倒转180°，管内呈坚实凝胶者记为(+)阳性，不呈凝胶或凝胶不能保持原形者，皆记为(-)阴性，被检品的反应管皆为(-)阴性结果，认为合格，被检品反应管皆为阳性(+)结果，认为不合格，若被检品二管中，有一管为阳性(+)，一管为阴性(-)时，应重新操作，并注意严格无菌操作。

本发明简化了实验操作的准备工作，一盒在手即可使用，成本消耗降低35-50％，节约了实验材料和能源，提高了工作效率及准确性、灵敏性。

附图说明

图1是本发明盒的结构图

本发明为适应广大用户在实际工作中的需要，将细菌内毒素检查法所需的有关用具经过特殊处理后，配套依次摆放在快检盒内，明确被检品批号的数量，只需点燃一盏酒精灯，即可按上述步骤开展检测工作。快检盒中的鲎试剂必须与细菌内毒素具有专一性凝胶反应的特异性，为保证各种药品的细菌内毒素限量检查，鲎试剂灵敏度控制在1、0.5、0.25、0.125、0.06、EU/ml以便配套选择，并要求其阴性观察在10小时以上不得自凝。鲎试剂装置一般按0.1、0.5、1.5ml/支，也可按特殊需要制备特殊装量的鲎试剂。细菌内毒素工作标准品，是配发给用户作灵敏度复试和阳性对照之用。故其活性单位(入)在10-5EU/ml为宜，并保证其质量的稳定性，同国家参考标准品作平行标定时，工作品的误差应保持在200-50％范围内。做阳性对照时，应将细菌内毒素工作品稀释成2EU/ml再行使用。鲎试剂溶解液是用于复溶鲎试剂和稀释检品之用，其质量要求：PH应在6.0-7.2之间；自身阴性观察，采用0.06EU/ml鲎试剂检查24小时不得自凝；溶解液每支装量为5ml，配备支数可依据检测需要加减，为保证实验的准确性，在实验时，严格无菌操作，有条件的应在净化工作台上进行操作，没有超净台时，应在干燥无尘埃流通的干净环境操作，细菌内毒素快检盒中配套的移液滴管及空瓶已严格无热原处理，在使用前可将移液滴管置酒精灯火焰上烤2-3分钟，避免管口不密封造成的空气污染。