[发明专利]基因转移的修饰蛋白及其制备方法

说明书

本发明涉及缀合物

I)可与人体细胞的特异性受体结合的生物活性肽或蛋白质，和

II)对核酸、尤其是DNA具有亲和力，并且有包含核酸能力的高分子物质，以及制备所说缀合物的方法。

此缀合物可与具有特异性受体的细胞结合，并可将缀合物中包含的核酸转移到细胞中。另外，本发明涉及用于基因治疗的缀合物，其中基因可被转移至人体的特异型细胞，特异性器官或肿瘤细胞。

已知大量具有生物活性的肽或蛋白质，它们在下文中也被称作“生物活性肽”。

它们的例子是从自然界中得到的生物活性肽，例如在人体中显示出生理作用的肽，如白细胞介素(IL))—1，—2，—3，—4，—5，—6，—7，—8，—9，—10，—11和—12，G—CSF，GM CSF，M—CSF，促红细胞生成素，干细胞生长因子(SCF)，mp1—配体，α—，β—和γ—干扰素，促生长素抑制素、加压素、胰岛素、生长激素和P物质；通过修饰上述肽而得到的肽；从动物中衍生的物质，如铃蟾肽；从微生物中衍生的物质，如白喉毒素；从植物中衍生的物质，如凝集素。抗体也是生物活性肽，抗体不仅包括人的单克隆抗体也包括动物的单克隆抗体。大多数生物活性肽可与相应受体特异性地结合以激活它们的生理功能，抗体可与相应抗原特异性地结合。

可溶的受体包括人体中存在的受体以及通过基因重组方法人工制备的受体。这些可溶受体象人体膜受体一样可与配体特异性地结合。

据认为通过使用上述特异性的结合可将特异的生物活性肽用作靶分子。例如，已尝试用以下方法，其中白喉毒素与IL—6分子结合，并特异性地运送至具有IL—6受体的肿瘤细胞，因而可杀死肿瘤细胞。另外，将抗肿瘤剂结合到可识别癌症特异性抗原的单克隆抗体上以将抗肿瘤剂特异运送至肿瘤细胞的方法也发展成有效的方法。

另外，在药物传送系统(DOS)中使用生物活性肽的方法在基因治疗领域也很重要。George Y.Wu等人已开发出基因治疗，其中聚赖氨酸(带正电荷)通过化学方法与生物活性肽，如脱唾液酸血清类粘蛋白结合，此缀合物包含DNA质粒(带负电荷)以将DNA运送到具有脱唾液酸糖蛋白受体的肝细胞中(J.Biol.Chem.，236，14621，1988)。通过静脉内注射，此缀合物可将此基因转移至肝中，它很有希望成为有效的基因传送系统。所要治疗的疾病要依靠被传送的基因。在基因治疗的一种方法中，病毒的胸苷激酶基因被转移至肝中，通过胸苷激酶被激活的抗病毒药物9—(1，3—二羟—2—丙氧甲基)鸟嘌呤也被转移，此抗病毒药物只在肝中被激活，因而病毒疾病治疗所产生的副作用较小。

当核酸被施用于人体以进行基因治疗时，此核酸快速地被酶降解，否则DNA不能轻易进入细胞。另外，在此基因治疗中，当基因插入基因组时，对一些插入部分而言细胞是不匹配的，或者说通过转移基因表达的物质有时与细胞不相匹配。所以，以下情况是必需的。

I)在核酸不被降解的条件下将核酸运送至细胞。

II)核酸以高速转移至细胞。

和核酸尽可能多地被转移至需要治疗的特异性细胞中。

针对上述问题的一个解决方案是：使用一些聚合物来包裹核酸以抑制核酸的降解。另一个方法是：将与细胞上特异性受体结合的配体与核酸包含物联合，通过配体—受体结合，由细胞内吞作用将核酸转移至特异型细胞中，在这种情况下，有必要将包含有核酸的聚合物与作为配体的生物活性肽结合。

通常，当生物活性肽通过化学反应与修饰聚合物结合时，它们的生物活性趋于不相匹配，并通过不同的副反应形成了副产品，使得难于维持所产生的药物的质量。此药物需要保持不变的高质量水平。有必要开发一种实用的方法，其中具有包含核酸能力的高分子物质在适度的条件下可与生物活性肽特异地结合，而且在此方法中副反应也应该可以避免。

本发明涉及制备包含核酸的蛋白质的方法，它包括在转谷氨酰胺酶存在下，将具有至少一个谷氨酰胺残基的生物活性肽或蛋白质与含有氨基酸供体，并且有包含核酸能力的高分子物质反应，在谷氨酰胺残基的γ—位置处的酰胺部位与氨基酸供体的氨基基团形成酰胺键。

本发明涉及生物活性肽或蛋白质的缀合物，如白细胞介素—6和白细胞介素—2，以及具有包含基因能力的高分子物质，如聚赖氨酸。

本发明涉及含有生物活性肽或蛋白质的缀合物和具有包含基因能力的高分子物质以及核酸的核酸组合物。

本发明也涉及用于基因转移治疗的药物组合物，它包括所说缀合物和药用可接受载体。

本发明也涉及用于基因转移治疗的药物组合物，它包括所说核酸组合物和药用可接受载体。