[发明专利]一种重组双顺反子表达质粒及其制备方法和用途

权利要求书

1、一种重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子双顺反子表达质粒，其特征是其双顺反子的化学结构(核苷酸序列)如下： 5′ ATG  AAA  CTC  GAG  TAG  GAG  GAT  TAA  GAA  TTC  ATG  GCACCA  GCT  CGT  TCT  CCA  AGC  CCC  AGC  ACG  CAG  CCC  TGG  GAGCAT  GTG  AAT  GCC  ATC  CAG  GAG  GCC  CGG  CGT  CTC  CTG  AACCTG  AGT  AGA  GAC  ACT  GCT  GCT  GAG  ATG  AAT  GAA  ACA  GTAGAA  GTC  ATC  TCA  GAA  ATG  TTT  GAC  CTC  CAG  GAG  CCG  ACCTGC  CTA  CAG  ACC  CGC  CTG  GAG  CTG  TAC  AAG  CAG  GGC  CTGCGG  GGC  AGC  CTC  ACC  AAG  CTC  AAG  GGC  CCC  TTG  ACC  ATGATG  GCC  AGC  CAC  TAC  AAG  CAG  CAC  TGC  CCT  CCA  ACC  CCGGAA  ACT  TCC  TGT  GCA  ACC  CAG  ACT  ATC  ACC  TTT  GAA  AGTTTC  AAA  GAG  AAC  CTG  AAG  GAC  TTT  CTG  CTT  GTC  ATC  CCCTTT  GAC  TGC  TGG  GAG  CCA  GTC  CAG  GAG  TGA  3′。

2、一种如权利要求1所述的重组人GM-CSF双顺反子表述质粒的制备方法，其特征是将一个带有起始密码子和终止密码子的能在大肠杆菌中高效表达的寡核苷酸片段与带有起始密码子和终止密码子的GM-CSF成熟肽编码区cDNA的5′端相连。

3、一种如权利要求2所述的方法，其特征是将寡核苷酸片段5′ATGAAA CTC GAG TAG GAG GAT TAA G3′与人GM-CSF成熟肽编码区cDNA的5′端相连接。

4、一种如权利要求2或3所述的方法，其特征是将所述寡核苷酸片段与人GM-CSF成熟肽编码区cDNA及带有P_RP_L启动子的原核表达载体PBV220连接，并使该寡核苷酸片段位于GM-CSF cDNA的5′端。

5、一种如权利要求2或3所述的方法，其特征是所述寡核苷酸片段的正意链为：5′ATG AAA CTC GAG TAG GAG GAT TAA G3′，反意链为：3′TAC TTT GAG CTC ATC CTC CTA ATT CTT AA5′。

6、一种如权利要求4所述的方法，其特征是将所述重组入PBV220中的寡核苷酸与GM-CSF cDNA融合物在大肠杆菌中进行表达。

7、一种如权利要求6所述的方法，其特征是所述大肠杆菌为DH5a。

8、一种如权利要求1所述的重组人GM-CSF双顺反子表达质粒的用途，其特征是用于制备重组人GM-CSF。

9、一种权利要求1所述的重组人GM-CSF双顺反子表达质粒的用途，其特征是用于在大肠杆菌中表达重组人GM-CSF。

10、一种如权利要求9所述的的用途，其特征是所述大肠杆菌为DH5α。