[发明专利]使血浆中逃逸免疫检测病毒失活的组合物及其应用

说明书

本发明涉及杀病毒的组合物及其应用，特指一种新的使存在于已被感染了的、但通过常规免疫方法对此病毒不发生抗体的输血者的血浆中的被膜病毒，如存在于供血血浆中的HIV(人体免疫缺乏性病毒)和HCV(肝C病毒)失活的组合物，特别地，本发明提供了在没有去污剂存在的条件下，有机溶剂破坏这些病毒的保护性膜的用途和方法。

Horowitz公开了一种用溶剂和去污剂相结合使病毒失活的方法：Mrogenthaler J-J(ed)：Virus Inactivation in plasma products，curr stundHematol Blood Transfus Basel Karger，1989，N0.56，PP83-96，此文揭示了在37℃以下仅用磷酸三正丁酯，杀病毒的能力会被减弱，在此条件下没有任何一种去污剂(胆酸钠或Tween-80)是杀病毒的。然而，在37℃时，当磷酸三正丁酯和去污剂共存时却能获得优异的杀病毒能力。

本发明的目的在于提供一种使血浆中逃逸免疫检测病毒失活的组合物及其应用，在磷酸三正丁酯中引进低分子醇，达到在28℃以下更快或更完全地杀死病毒的目的。

本发明所公开的组合物的成分和配比为(体积份数)：

低分子醇          1-3

磷酸三正丁酯      100

其中所述的低分子醇是乙醇、丙醇或丁醇。

根据本发明，已发现在磷酸三正丁酯中加入1-3％(V/V)的乙醇、丙醇或丁醇，在处理后，在10分钟内杀死标记病毒的有效性与仅用磷酸三正丁酯相比，至少提高了10倍，这样将大大降低实际中所有病毒失活所需要的时间。

根据本发明，已发现将本发明的组合物接种兔子，会形成抗此病毒的抗体。

优选实施方案的详细叙述如下：

虽然下面描述的实施方案使用乙醇和丁醇，但任何数量的部分憎水小分子都是有效的，并且这些实施例应被认为仅是用于说明的。

化学试剂可从商业供应处买到，尽可能使用不需要进一步纯化的最高级别的化学试剂。这里使用的标记病毒，Sindbis病毒的滴定度，是通过使用原发性鸡胚胎细胞的终点滴定和细胞学测定。

新鲜冷冻的血浆(FFP)和低温沉淀物(CYO)由无既往或最近病毒感染的健康个人提供。

实施例1

在磷酸三正丁酯中加入低分子醇对病毒失活的效率试验。

将FFP或CYO样品用Sindbis病毒人为污染。然后将磷酸三正丁酯本身或将每100份体积磷酸三正丁酯中分别加入0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0份乙醇，每100份的血浆蛋白溶液中分别加入一份上述磷酸三正丁酯和含乙醇的磷酸三正丁酯，在28℃时加入到蛋白质组分中，一次一次地(在每10分钟间隔内)等份数地移取溶液使反应，通过用5％的小牛血清稀释至100倍过量的很小Essential Medium Eagle并冷冻至终止，直至最后测定病毒滴定度，发现通过在磷酸三正丁酯中加入2-3％乙醇中，在第一个10分钟内，病毒失活的程度比仅用磷酸三正丁酯大10倍，其在低温沉淀中的效果比FFP溶液更为显著。

第二种试验是将0.5、1.0、1.5和2.0体积份的丁醇加入至100体积的磷酸三正丁酯中，发现最有效的浓度为1.0至1.5％的丁醇。同样加入丁醇的磷酸三正丁酯在28℃时的失活的效果比不加入丁醇的磷酸三正丁酯增加约10倍。

将一部份具有失活病毒的FFP通过皮下、静脉和肌肉注射，使兔子免疫，经过给药三周后，在处理的兔子的血清中，检测到抗病毒的抗体。

本发明提供的使血浆中逃逸免疫检测病毒失活的组合物，可以快速完全地使被膜病毒失活，提供了一种新的使病毒失活的方法。