[发明专利]用糖厂废液生产淡紫拟青霉菌剂的方法

说明书

本发明涉及一种利用微生物真菌生产杀虫剂的方法。

植物线虫使农作物减产，按最保守的估算，全国农作物种植业每年约损失233亿元。目前对线虫病的防治主要以化学杀线虫药为主。虽然有一定效果，但易造成环境污染，且污染农产品，造成食用农产品后中毒的事件时有发生。鉴于此，人们开始从生态角度另觅新法，采用生物防治法取代化学防治成为必然趋势。线虫的天敌种类很多，主要有真菌、细菌、病毒等。在真菌中有一种可破坏线虫的内寄生真菌——淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)，该菌能感染根结线虫(Meloidogyne SPP.)和胞囊线虫(Globodera SPP.与Heterodera SPP.)等重要植物线虫的卵并吸收其卵内物质，使卵的孵化率降低，根部虫瘿和卵块的数量减少，因此应用它来对于有害线虫进行防治具有巨大潜力。

本发明的目的旨在提供一种以糖厂的废料——糖蜜和甘蔗渣制造能防治经济作物寄生线虫的淡紫拟青霉菌剂的方法，该方法既可提供高效无毒的杀线虫药物，又可解决糖厂的废料处理问题。

本发明的技术方案如下：

步骤一：一级培养，将普通真菌培养基分装成斜面，接种淡紫拟青霉菌种，在20～30℃温度下培养5～15天，以28℃培养7天为佳。

步骤二：二级培养，将糖蜜稀释成1/8～1/16，或废糖蜜掺入1/10～1/20的糖蜜或其他碳源，PH调至5.5～7，以6～6.5最佳，混合后，经常规高压灭菌后接种一级培养物，在25～30℃温度下振荡培养5～10天，最佳条件是28℃下振荡培养7天。

步骤三：三级培养，将稀释成1/8～1/16的糖蜜或按1/10～1/20添加糖蜜或其他碳源的废糖蜜与甘蔗渣拌匀，成挤捏不滴水的粉团，经湿热灭菌后将二级培养液吸附上去，在25～30℃温度下再培养5～15天，一般以28℃培养10天最佳，风干后成糕块状，淡紫色，容易散开，以粉状或糕块状保存皆可。

用此法生产的淡紫拟青霉菌剂，每克样品含2.6×10⁶～3.4×10⁶个孢子。按4g/Kg土壤的剂量在作物移栽之前将菌剂粉碎拌入土中，可有效降低虫口密度(盆栽番茄试验，试验组的虫瘿，卵块和雌虫均比对照组减少90％以上)。淡紫拟青霉菌剂作为一种新型的生物杀线虫剂，可用于大豆、甜菜、马铃薯、麦类、玉米、棉花、花生、香蕉、柑桔、菠萝、茶苗、甘蔗、甘薯、烟草、杨梅、罗汉果、猕猴桃、桃、番茄、辣椒、茄子、柿、胡萝卜、葡萄、草莓、无花果、黄瓜、南瓜、甜瓜、西瓜、苦瓜、菜豆等许多作物的线虫防治，不但提高产量，而且避免使用化学杀线虫药。用糖厂的废液废渣制造该菌剂，可以使废料资源化，既降低工业成本，又减少环境污染。

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：将纯化的淡紫拟青霉菌种接种到马铃薯-葡萄糖琼脂培养基(PDA)斜面上，在28℃下培养7天；用糖厂的糖蜜12.5ml加水87.5ml配制成培养液，PH调至6.3，混合后经常规高压灭菌后接种上述一级培养物，在28℃条件下振荡培养7天；再将12.5ml的糖蜜掺87.5ml水后与甘蔗渣拌匀，甘蔗渣的加入量以挤捏不滴水为度，经湿热灭菌后将二级培养液吸附上去，在28℃下再培养10天，风干后成糕饼块状。称取1g菌剂，置于高速组织捣碎机内搅散，然后用清水洗出定容500ml，吸取少量滴于血球计数板上镜检计数，经计算每g菌剂含3.5×10⁶个孢子。

实施例2：淡紫拟青霉菌的一级、二级培养同实施例1，在三级培养中取8.3ml糖蜜加入91.7ml水，加入甘蔗渣拌匀至挤捏不滴水，经湿热灭菌后将二级培养液吸附上去，于28℃下再培养10天，风干后成糕块状。经测定每克菌剂含3.0×10⁶个孢子。

实施例3：与实施例1不同的是三级培养物的配比，取6.3ml糖蜜加93.7ml水，加入甘蔗渣拌匀，其余方法及条件同实施例1，经测定每克菌剂含2.3×10⁶个孢子。

实施例4：在马铃薯-葡萄糖琼脂培养基(PDA)斜面上接种淡紫拟青霉菌菌种，在20℃下培养15天；用8.3ml糖蜜加91.7ml水制成液体培养液，PH调至5.5，经高压灭菌后接种PDA上的培养物，在25℃温度下振荡培养10天；用12.5ml糖蜜加87.5ml水再加甘蔗渣，湿热灭菌后接种上述培养物，在25℃温度下再培养15天，风干后成糕块状。