[发明专利]识别表皮生长因子受体的人源化和嵌合体单克隆抗体

说明书

本发明涉及免疫学领域，特别是涉及嵌合体和人源化抗EGF-R单克隆抗体的二种新产品，这些抗体比原始鼠单克隆抗体的免疫原性低并具有改进的效应子功能。

本发明还涉及含有这些抗体的治疗和诊断组合物。

表皮生长因子(EGF)，一种53氨基酸多肽，分子量6045D，首次从鼠下颌腺分离和提纯(Cohen S；J.Biol.Chem(1962)237，1.555)。以后，从人尿中获得类似的分子(Cohen S和Carpenter G；(1975PN AS USA 72，1317)。这种多肽的作用主要通过其膜受体，一种170KD分子量糖蛋白完成。将其胞内区域同与显示恶性转化过程有关的致癌基因V-erb-B结构同源的酪氨酸激酶活性结合(Heldin C.H.等人(1984)Cell 37，9-20)。

高水平的EGF-R已在源于上皮(epitelium)的恶性肿瘤，例如乳房、膀胱、卵巢、阴门、结肠、肺、脑和食管癌中检测出。EGF及其受体在调整肿瘤生长中的作用是未知的，但已有人提出在肿瘤细胞中EGF-R的表达提供了导致无控制增生autocrine生长刺激的机理(Schlessinger J；Schreiber A.B；Levi A；Liberman T和Yarden Y；(1983)Crit.Rev.Biochem 14(2)，93-111)。

已有报导，EGF除了在一些细胞系统调整其分化外(TonelliC.J；Nature(1980)，285，250-252)，还造成乳腺癌细胞系的过度生长(Osborne C.K等人(1980)，Cancer research 40，2.361)这些对细胞分化和增生的作用涉及到EGF-R的高度表达(Buss J.E等人，1982，P.N.A.S.79，2.574)。

在肿瘤细胞中EGF-R的存在已证明是一种人乳腺癌不良预后的指征。大约40％乳房肿瘤显示对EGF的高亲合性特异性结合位点(Perez，R；Pascual，M.R；Macias A；Lage，A(1984)BreastCancer Research and Treat.4，189-193)。与雌激素受体的存在也有一种反向相关性，表征EGF-R作为不分化的标记或恶性细胞增生潜在能力的指示剂。

其它研究组已有报道，EGF-R的表达在初期乳腺癌中的区域神经节转移中是较高的(Sainsbury J.R等人，(1985)Lancet 1，8.425，364-366)，并且受体的表达在人乳腺癌细胞的不同hystologic亚型中是不同的，它的存在构成一个不良预后的信号(Macias，A等人(19)，Anti Cancer Research，6：849-852)。

在不同的研究中获得的资料已促使考虑将EGF-EGF-R系统用作治疗作用可能的靶子。

我们获得了一种如欧洲专利申请No.93202428.4中所述对人胎盘产生的鼠单克隆抗体(R3)，并发现其与人EGF-R的外部区域结合。发现在低和高EGF-R亲和位点都抑制EGF的结合。

使用对EGF-R的单克隆抗体被动免疫疗法已是许多研究的目的，已经证明，抗体受体的特异识别抑制EGF的结合，同时对恶性细胞的促有丝分裂刺激有抑制作用(Sato J.D等人1987，Methods in Enzimology，14863-81)；但事实证明，来自鼠的这些抗体，产生人抗鼠抗体反应。  

由Kohler和Milstein发展的杂交瘤抗体技术革新了免疫化学的定律并提供了在临床诊断和免疫治疗中具有潜在用途的一族新的试剂(Kohler G；Milstein C.(1975)Nature 256，495-497)。尽管它已成为用于基础研究和临床诊断中的生产鼠单克隆抗体(mAbs)的常规，但仍难于将它们用于体内免疫治疗。因为它们在人体中活力减少一半，通过人免疫系统识别鼠抗体效应子区域的能力较差，并且外来免疫球蛋白可引出抗球蛋白应答(HAMA应答)，可能干扰治疗。

遗传操作抗体基因并随后通过转染技术表达这些改变的基因的能力使我们可以生产具有比现有的杂交瘤抗体更合乎要求性能的mAbs。从而可使用基因工程以提高抗体分子中所需的效应子功能并降低或消除不需要的效应子功能。