[发明专利]用农杆菌介导外源基因转化水稻的方法

权利要求书

1、以农杆菌介导外源基因转化水稻的方法，其特征是用含有诱导性信号分子F1、F2和AS的培养液诱导培养携带有外源基因重组质粒的农杆菌，得到诱导菌液，再将该诱导菌液与经致伤处理的水稻幼苗一起在旋转磁场中共培养，即可获得转基因水稻幼苗；所说的诱导性信分子F1、F2和AS分别为5，7，4＇-三羟基-3＇，5＇-二甲氧基黄酮、5，4＇-二羟基-3＇，5＇-二甲氧基-7-(β-D葡萄糖基)黄酮和乙酰丁香酮。

2、按照权利要求1所述的方法，其特征是包括以下步骤：

(1)将经消毒灭菌处理的水稻种子按常规进行萌发培养；

(2)用AB诱导培养液悬浮携带有外源基因重组质粒的农杆菌菌体，培养成为AB诱导菌液；所说的AB诱导培养液是在AB培养液中加入诱导性信号分子F1、F2和AS而成，该三种信号分子在AB诱导培养液中的浓度分别为0．1～100μM；

(3)将经步骤(1)萌发培养3～10天的水稻幼苗的叶片及根部表面轻轻划线致伤；

(4)在N6培养液中加入AB诱导菌液成为共培养液；将经步骤(3)致伤处理的水稻幼苗移入该共培养液中，在旋转磁场中培养5～120小时；

(5)撤去旋转磁场，用N6培养液置换共培养液，继续培养10～120小时。

3、按照权利要求2所述的方法，其特征是所说的AB诱导菌液的菌体密度为O．D_600nm=0．45～1．2；所说的共培养液中AB诱导菌液的加入量按体积比为0．1～10％。

4、按照权利要求2或3所述的方法，其特征是其中步骤(4)的培养是在磁力搅拌器-摇床装置上进行。

5、按照权利要求2或3所述的方法，其特征是其中步骤(4)和(5)的培养温度为24～30℃。