[发明专利]虫荧光素酶

权利要求书

1.一种具有虫荧光素酶活性的蛋白，其与从螟萤火虫、明格列尔萤火虫、十字萤火虫或横纹萤火虫获得的虫荧光素酶有60％以上的氨基酸序列同源性，其特征为对应于螟萤火虫的虫荧光素酶第354位残基或明格列尔萤火虫、十字萤火虫和横纹萤火虫的虫荧光素酶第356位残基的氨基酸残基是非谷氨酸的氨基酸。

2.权利要求1中的蛋白，其特征在于它包含一段氨基酸序列XGDDKPGA，其中X是非谷氨酸的氨基酸。

3.权利要求2中的蛋白，其特征在于它包含一段氨基酸序列TPXGDDKPGA，其中X是非谷氨酸的氨基酸。

4.权利要求1、2或3中的蛋白，其特征在于氨基酸X不是甘氨酸、脯氨酸或天门冬氨酸。

5.权利要求1、2或3中的蛋白，其特征在于氨基酸X是色氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和天门冬酰胺中的一种或它们之中任何一种的类似物或修饰体。

6.权利要求1、2或3中的蛋白，其特征在于氨基酸X是赖氨酸和精氨酸中的一种或它们之中任何一种的类似物或修饰体。

7.一种包含第2号序列中所描述的氨基酸序列的蛋白，其中Xaa是权利要求5或6中所列的任何一种氨基酸或其类似物或修饰体。

8.编码权利要求1至7任一权项中的蛋白的DNA。

9.权利要求8中的DNA，它包含一个如第1号序列所描述的核苷酸序列，其中在1063至1065位的三个N碱基形成编码非谷氨酸的氨基酸的密码子。

10.权利要求9中的DNA，其中的密码子编码权利要求5或6中所列的氨基酸、类似物或修饰体。

11.一种包含编码权利要求1至7任一权项中的蛋白的luc基因的载体。

12.权利要求11中的载体，它可以通过将包含野生型或重组型luc基因的载体进行定点基因突变得到，该突变将编码螟萤火虫的虫荧光素酶第354位的谷氨酸或明格列尔萤火虫、十字萤火虫或横纹萤火虫的虫荧光素酶第356位的谷氨酸的密码子改变成编码其它氨基酸或氨基酸类似物或修饰体的密码子。

13.权利要求12中的载体，其中其它氨基酸是权利要求5或6中列出的任何一种氨基酸、类似物或修饰体。

14.权利要求9至13任一权项中的载体，它选自连接了luc基因的pKK223-3、pDR540和pT7-7。

15.一种可以表达权利要求1至7任一权项中的蛋白的细胞，它含有权利要求8至14任一权项中的DNA或载体。

16.权利要求15中的细胞，它是大肠杆菌、啤酒酵母或昆虫细胞。

17.一种通过测量ATP来进行检测的测试试剂盒，其特征在于该试剂盒所含的荧光试剂中含有权利要求1至7任一权项中的蛋白。

18.一种检测方法，其中ATP的测量是通过虫荧光素和虫荧光素酶产生光来进行的，其产生光的量与ATP的数量有关，该方法的特征在于虫荧光素酶是权利要求1至7任一权项中的蛋白。

19.权利要求18中的检测方法，其中检测是在30℃至70℃的温度下进行的。

20.权利要求18中的检测方法，其中检测是在37℃至60℃的温度下进行的。

21.权利要求18中的检测方法，其中检测是在40℃至50℃的温度下进行的。

22.一种虫荧光素酶的制备物，它可以在没有热稳定剂的情况下，在室温下保存10天后维持85％或更高的虫荧光素酶活力。

23.将权利要求1至7或22任一权项中的虫荧光素酶用作特异性结合试剂标记的应用。

24.一种检测试剂盒，其特征在于它包含用权利要求1至7任一权项中的虫荧光素酶标记的特异性结合试剂。

25.将权利要求8至14任一权项中编码虫荧光素酶的DNA或载体用于表明细胞或DNA特性的应用。