[发明专利]经改良修饰的BRSV或疫苗

说明书

发明领域：

本发明涉及诱导抗牛呼吸道合胞病毒(BRSV)之保护性免疫力的改良方法，具体地说，涉及使用适于以单一剂量施予接受体动物之经修饰活疫苗的改良方法。

发明背景：

目前认为牛呼吸道合胞病毒(BRSV)是牛呼吸道疾病综合症(BRDC)重要的致病原。此病的特征为：呼吸急促，咳嗽、厌食、泪涕交流和体温上升。急性暴发此病时，症状开始48小时内出现死亡。

BRSV可感染包括乳牛在内的各年龄段的牛。据认为BRSV是一种最常见的小牛地方性肺炎病毒病原体，BRSV还与刚断奶小牛的肺气肿病相关。因此需在牛和奶牛群中有效预防此病毒。

建立抗BRSV的保护性免疫力是有困难的。因为在一些其他病毒介导的疾病中，抗BRSV的血清抗体水平并非必需与抗此病的保护作用相关。这种现象可反映出局部产生的抗BRSV的IgA之作用(Kimman etal.，J.Clin.Microbiol.25：1097-1106，1987)，和/或能对此病毒进行有效防御之细胞介导的免疫力的需求。由于母体中抗BRSV的抗体能耗尽注射到体内的免疫原并有效地中和疫苗，因此在乳牛中建立保护性免疫力遇到另外的阻碍。最终，多次接种的不便和昂贵使得单一剂量的疫苗引人注目。因此本领域中需要能引起强有力的多方面免疫应答的单一剂量的BRSV疫苗制剂。

现有技术中BRSV疫苗的标准施用方案为二次剂量(Stott et al.，J.Hyg.Camb.93：251-261，1984；Thomas et al.，农业实践(Agri-Practice)5：1986；and Syvrud et al.，Vet.Med.83：429-430，1988；兽医药物学和生物学(Veterinary Pharmaceuticals&Biologicals)、Edition 8 1993/94，PP.484.740-741/956-960，982-983.)。如Kucera等人所述(Agri-Practice，Vet.Med.，Vol.78.Octoker1983，PP.1599-1604，1983)，单次实验性BRSV接种诱导的BRSV血清中和(SN)抗体效价水平相对较低，而两次剂量的疫苗诱生了1∶10至1∶320的SN抗体效价。另外，在牧场试验过程中，对于明显暴露于BRSV的兽群而言，约48％未接种的动物需要治疗呼吸道疾病，相比之下，以单剂量和双剂量接种的动物中分别有27％和21％的动物需要这种治疗。然而，牧场试验中呼吸道疾病的致病剂并不能确定为BRSV，而且值得注意的是单剂量疫苗并未显示出具有很强的免疫原性。从后一种评价中可得出结论，即此疫苗的两次剂量对于获得良好的保护作用是必需的(牛兽医论坛1：NO.2 PP.2-16，1986；Syvrud.et al.，兽医医学429-430，1988)。

欧洲专利申请129,923(公开于1985年2月1日，作为专利登记于1988年7月9日)描述了一种制备BRSV活疫苗的方法，此方法包括将活疫苗溶解于经灭活的含有一种或多种抗原(尤其是灭活的流感病毒)的疫苗中，后者被配制成水包油乳剂。在仍具有母体免疫力的幼畜中得到了血清学反应。此申请还描述了包括BRSV和佐剂的经修饰的活制剂，然而却未提供有关任何BRSV疫苗抗BRSV攻击之保护效力的数据。

本发明的一个目的是提供抗BRSV的有效疫苗，它可诱生保护性免疫力并能防止由所说病毒引起的疾病。

本发明的另一个目的是提供适用于BRSV疫苗的佐剂，其中的佐剂增强病毒的免疫原性以使施用单剂量疫苗后能诱生保护性免疫力。发明概述    

本发明包含增强免疫应答的组合物，它含有嵌段共聚物，如聚氧丙烯-聚氧乙烯(POP-POE)嵌段共聚物，优选为Pluronic^L121(例如美国专利4,772,466)，还含有有机成分，如可代谢的油类，如不饱和的turpin烃，优选角鲨烷(2，6，10，15，19，23-六甲基二十四烷)或角鲨烯。所述组合物也可包括非离子型洗涤剂或表面活性剂，优选聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯，如Tween^洗涤剂，最优选Tween^-80，即聚氧乙烯(20)山梨聚糖单油酸盐。