[发明专利]三叶形肽双体

说明书

本发明涉及三叶形肽双体，一种制备三叶形肽双体的方法，一种含有三叶形肽双体的药物组合物及其在治疗胃肠道疾病方面的用途。

三叶形肽是肽的一个家族，主要见于与胃肠道相关的部位。哺乳动物的三叶形肽含有一个或几个特有的三叶形结构域(Thim等，1989)，每个结构域是由一段有38或39个氨基酸残基的序列构成，其中，6个半-胱氨酸残基以1-5、2-4和3-6构型连接，从而形成一种特有的三叶形结构(Thim,1989)。

现在所知的三叶形肽类含有一个或两个三叶形结构域(见Thim,1994；Poulsom & Wright,1993；Hoffmann & Hauser,1993)而蛙，爪蟾肽及蛋白质，已报导其含有一个(Hauser & Hoffmann,1991)、二个(Hauser等，1992a)四个(Hoffmann,1988)或六个(Hauser& Hoffmann,1992b)三叶形结构域。带有一个结构域的哺乳动物三叶形肽包括迄今所知的与人的乳腺癌有关的pS2肽(Jakowlev等，1984,Prudhomme等，1985)和与小鼠有关的pS2肽(Lefebvre等，1993)，及迄今所知获自人(Podolsky等，1993；Hanser等，1993)和大鼠(Suemori等，1991；Chinery等，1992)的肠道三叶形因子。已报导了从人(Tomasetto等，1990)、猪(Thim等，1982)和小鼠(Tomasetto等，1990)体内得到的含有两个三叶形结构域的解痉多肽(SP)。在人体内，三种三叶形肽hpS2、hITF和hSP都是在正常条件下在胃肠道中表达的：hSP和hps2是在胃的上皮粘膜层中表达(Tomasetto等，1990；Rio等，1988)，hITF是在小肠和结肠的上皮粘膜层中表达(Podolsky等，1993)。

对这种三叶形肽的生理功能尚不十分清楚。已有报导说三叶形肽在胃肠道中大量表达与几种粘膜损伤有关，如发炎性肠道疾病(Rio等，1991；Poulsom等，1992；Wright等，1993)，并且与胃和十二指肠溃疡有关(Rio等，1991；Hanby等，1993；Wright等，1990)。由此表明，这种三叶形肽具有粘膜修复功能(例如，Wright等，1993)。Dignass等(1994)、Playford等(1994)和Bahyatsky等(1994)最近提供了三叶形肽促进粘膜上皮层受伤后重建的证据。三叶形肽促进修复功能的机理可能是，交联的粘蛋白一糖蛋白构成了抵御消化酶的粘弹性凝胶层(Thim,1994；Gajhede等，1993)。

在WO92/14837中披露了大鼠和人单一结构域肠道三叶形因子的克隆及将这种肠道三叶形因子用于治疗胃肠损伤的用途。

业已发现，可以制备仅有一个三叶形结构域的三叶形因子双体，而且其具有有价值的药理学特性。

因此，本发明涉及一种带有单一的三叶形结构域的三叶形肽，这种肽的特征在于它是呈双体形式。

如上所述，据信三叶形肽可通过稳定肠道的粘膜层而治愈消化性溃疡和其它粘膜损伤。这种稳定作用的机理目前尚不清楚。不过，对具有两个三叶形结构域的猪胰腺解痉多肽(PSP)进行的X-衍射分析(见Gajhede等，1993)表明，在每个结构域中，大部分保守残基构成宽8-10A的裂缝。初步停靠实验已经证实，所述裂缝可以容纳寡糖链，如与粘蛋白糖蛋白结合的碳水化合物的一部分。如果事实确实如此的话，带有两个这种裂缝的PSP能够与粘蛋白交联，在粘膜上皮上面形成一层保护性凝胶层。现在还不清楚的是，具有单一三叶形结构域的三叶形肽(如ITF和pS2)是在体内形成双体后产生一种类似的功能还是具有不同的作用机理。不过，现在相信，这种三叶形肽双体确实能与粘蛋白交联，因此，它是这种肽的活性形式。

另一方面，本发明涉及一种制备带有单一三叶形结构域的三叶形肽双体的方法，该方法包括：培养一种用编码一种带有一个三叶形结构域的三叶形肽的DNA序列转化一种合适的宿主细胞，培养是在有利于所述肽产生的条件下进行；以及从培养物中回收所产生的三叶形肽双体。

再一方面，本发明涉及一种药物组合物，它含有带有单一三叶形结构域的三叶形肽双体和一种可以药用的稀释剂或媒介物。

另一方面，本发明涉及一种被用作药物的带有一个三叶形结构域的三叶形肽双体，以及将一种带有一个三叶形结构域的三叶形肽双体用于制备用来预防或治疗胃肠疾病的药物的用途。