[发明专利]化学药物向特定细胞的细胞内载运

说明书

本发明背景

本发明涉及化学药物向细胞的载运。更具体地说，本发明涉及用于化学药物向特定细胞类型，即表达CR2受体的细胞，细胞内载运的组合物和方法。

用靶向细胞表面受体或肿瘤细胞上抗原的毒素治疗癌症已经引起相当的注意。例如，I.Pastan&D.FitzGerald，Recombinant Toxins for CancerTreatment，254 Science 1173(1991)；Anderson等人的美国专利5169933和5135736；Thorpe等人的美国专利5165923；Jansen等人的美国专利4906469；Frankel的美国专利4962188；Uhr等人的美国专利4792447；Masuho等人的美国专利4450154和4350626。这些药物包括与植物或细菌毒素相连的靶向细胞的部分，如生长因子或抗原结合蛋白。它们杀死细胞的机制不同于传统的化疗法，因此有效地降低或消除了对传统化疗药物的交叉抗性。

膜糖蛋白CR2(也称为CD21)在成熟B淋巴细胞(B细胞)和特定的上皮细胞，如人咽上皮细胞，人滤泡树状细胞和颈上皮细胞上产生，而且是E-B病毒(EBV)和补体片段C3d/C3dg的受体。N.Miller&L.M..Hutt-Fletcher，66 J.Virol.，3409(1990)。该受体是145KD的膜糖蛋白，除其结合功能外，它还参与B细胞激活途径。如G.R.Nemerow，等人，Identification and Characterization of the Epstein-Barr virus receptor onhuman B lymphocytes and its relationship to the C3d complementreceptor(CR2)，55 J.virol 347(1985)。EBV感染的B细胞是通过该病毒的gp350/220被膜糖蛋白与CR2受体选择性结合，然后CR2受体和内部化以及受体-结合病毒颗粒的细胞内吞而引发的。例如Tedder等人(1986〔，Epstein-Barr Virus binding induces internalization of the C3dreceptor：a novel immunotoxin delivery system，137J.Immunol.1387(1986)。含有CR2受体的上皮细胞还结合EBV，但显然所述细胞是通过除受体介导的细胞内吞以外的机制而感染的。

Nemerow等人(Identification of gp350 as the viral glycoproteinmediating attachment of Epstein-Barr virus(EBV)to the EBV/C3dreceptor of B cells：sequence homology of gp350 and C3 complementfragment C3d，61J.Virol.1416(1987))已经鉴定了C3dg和gp350/220之间的氨基酸序列相似性，所述序列包括靠近gp350/220(Glu-Asp-Pro-Gly-Phe-Phe-Asn-Val-Glu；SEQ ID NO：1)的结构域，它对应于C3dg中的序列(Glu-Asp-Pro-Gly-Lys-Gln-Leu-Tyr-Asn-Val-Glu；SEQ ID NO：2)。Nemerow等人(Identification of an epitope in the major envelope proteinof Epstein-Barr virus that mediates viral binding to the B lymphocyteEBV receptor(CR2)，56 Cell 369(1989))已经描述了与纯化CE2受体和CR2-表达B细胞均结合的含鉴定为SEQ ID NO：1之氨基酸序列的合成十四肽。该合成肽还阻断重组gp350/220或C3dg与B细胞上CR2受体的结合，而相似的合成肽抑制EBV的体外感染。截短和取代肽类似物的分析表明，与CR2结合有关的EBV表位在Glu-Asp-Pro-Gly-Phe-Phe-Asn-Val-Glu序列(SEQ ID NO：1)内。用较短的肽观察到结合水平降低，尽管Glu-Asp-Pro-Gly(SEQ ID NO：3)肽保留了显著的CR2结合活性。在该区域内含有用Gly取代Pro的单个氨基酸取代的肽的CR2结合活性也显著降低。